[發明專利]培育熒光蛋白mCherry標記微管蛋白的轉基因植物的方法及其相關生物材料

有效

• 申請號: 201410167195.9
• 申請日: 2014-04-24
• 公開（公告）號: CN105018521B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 孔照勝;柳婷;田娟;于艷軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N1/21;C12N5/10;A01H5/00;A01H6/20;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

本發明公開了培育熒光蛋白mCherry標記微管蛋白的轉基因植物的方法及其相關生物材料。該方法包括向受體植物中導入P_TUB6：：mCherry?TUB6，得到熒光蛋白mCherry標記植物微管蛋白的轉基因植物；P_TUB6：：mCherry?TUB6由mCherry?TUB6融合基因和啟動mCherry?TUB6融合基因轉錄的P_TUB6連接而成；mCherry?TUB6融合基因是編碼融合蛋白mCherry?TUB6的基因，融合蛋白mCherry?TUB6是將熒光蛋白mCherry與植物微管蛋白進行融合得到的蛋白質；P_TUB6是核苷酸序列是SEQ ID No.1的第1位到3004位所示的DNA分子。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及培育熒光蛋白mCherry標記微管蛋白的轉基因植物的方法及其相關生物材料。

背景技術

植物微管骨架是植物細胞骨架的一種組織形式，在植物細胞生長、細胞分裂、囊泡運輸、細胞器運輸、細胞壁合成以及生物和非生物脅迫反應等方面發揮著至關重要的作用。植物細胞中形成了一些植物特有的微管陣列，比如周質微管(Cortical Microtubules，CMTs)、早前期帶(Preprophase Band，PPB)和成膜體(Phragmoplast)。PPB、中心體、紡錘體微管和成膜體參與細胞有絲分裂，周質微管與細胞形態密切相關。

在許多研究中，需要將微管與生物過程聯系起來，因此微管的可視化是當務之急。早期的研究中為了觀察到微管采用免疫組織化學法，先用微管抗體結合微管，再用帶熒光標記的二抗處理，這樣使用熒光顯微鏡就能觀察到熒光抗體標記的微管(Ueda K，Matsuyama T and Hashimoto T(1999)Visualization of microtubules in livingcells of transgenicArabidopsis thaliana.Protoplasma206，201-206)。免疫法雖然可行，但存在操作復雜和只能使用經過固定細胞的缺點。操作復雜會提高實驗成本和影響結果精確性，經過固定的細胞已經死亡，無法觀察微管實時動態。如果能在活細胞中觀察到微管的動態，就更能深刻了解微管與生物現象之間的關系。

起初研究人員將羅丹明(Rhodamine)(Tanaka E and Kirschner M W(1995)Therole of microtubules in growth cone turning at substrate boundaries.TheJournal of cell biology128，127-137)或熒光黃(Fluorescein)(Zhang D，Wadsworth Pand Hepler P K(1990)Microtubule dynamics in living dividing plant cells：confocal imaging of microinjected fluorescent brain tubul in.Proceedings ofthe National Academy of Sciences87，8820-8824)結合到微管蛋白上，用顯微注射法打入活細胞內。這種方法雖然能夠標記活細胞微管，但只有少數顯微注射細胞能夠使用，而且顯微注射費時費力導致效率不高。