[發(fā)明專利]一種單細(xì)胞克隆培養(yǎng)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410166605.8
• 申請(qǐng)日: 2014-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN103923876A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王立民;周平;甘尚權(quán);唐紅;郭延華;張譯元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)墾科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京鼎佳達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒;劉鐵生

1.一種單細(xì)胞克隆培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟1，制備培養(yǎng)液微滴：在培養(yǎng)皿的間隔位置逐一地加入第一體積的培養(yǎng)液，形成液滴；隨后用石蠟油覆蓋所述液滴，然后再向每個(gè)液滴內(nèi)補(bǔ)入第二體積的培養(yǎng)液，形成培養(yǎng)液微滴；將其放入培養(yǎng)箱平衡，等待細(xì)胞的放入；

步驟2，準(zhǔn)備顯微操作系統(tǒng)：利用拉針儀拉制出細(xì)胞操作針，并安裝到顯微操作儀上；

步驟3，篩選單克隆細(xì)胞：將待篩選的細(xì)胞消化成單細(xì)胞懸液并放入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，利用步驟2所述的顯微操作系統(tǒng)根據(jù)篩選要求挑選目標(biāo)細(xì)胞，將目標(biāo)細(xì)胞逐一吸入顯微操作針內(nèi)；

步驟4，利用步驟2所述的顯微操作系統(tǒng)將操作針內(nèi)的目標(biāo)細(xì)胞以每個(gè)液滴培養(yǎng)一枚細(xì)胞逐一放入步驟1的培養(yǎng)液微滴內(nèi)，然后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

步驟5，對(duì)步驟4中所培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)過2天培養(yǎng)后，進(jìn)行半量換液；

步驟6，擴(kuò)大培養(yǎng)：對(duì)步驟4中經(jīng)過4～5天培養(yǎng)形成的細(xì)胞克隆進(jìn)行消化處理，分別將每個(gè)培養(yǎng)液微滴中消化出的細(xì)胞移入96孔板進(jìn)行培養(yǎng)，獲得細(xì)胞數(shù)量更多的單細(xì)胞克隆。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單細(xì)胞克隆培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟1，第一體積的培養(yǎng)液的體積為1～2.5μl，第二體積的培養(yǎng)液的體積為1～2.5μl，培養(yǎng)液微滴總體積為2～5μl，形成培養(yǎng)液微滴。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單細(xì)胞克隆培養(yǎng)方法，其特征在于，在顯微操作系統(tǒng)的顯微鏡觀察下，將目標(biāo)細(xì)胞利用顯微操作系統(tǒng)逐一收集。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單細(xì)胞克隆培養(yǎng)方法，其特征在于，所述半量換液是指吸去培養(yǎng)液微滴一半體積的培養(yǎng)液，重新補(bǔ)入37℃的與吸出體積相同的新鮮培養(yǎng)液。