[發明專利]一種鱖傳染性脾腎壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒及檢測方法有效
| 申請號： | 201410166595.8 | 申請日： | 2014-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN103966358A | 公開（公告）日： | 2014-08-06 |
| 發明（設計）人： | 林強;付小哲;李寧求;吳淑勤;石存斌 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院珠江水產研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 鄭瑩 |
| 地址： | 510380 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 傳染性 壞死 病毒 熒光 定量 pcr 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種鱖傳染性脾腎壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，包括如下組分：針對鱖傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）的特異性引物及探針、熒光定量反應液、Tap酶。
2.根據權利要求1所述的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述針對鱖魚傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）的特異性引物及探針是根據鱖魚傳染性脾腎壞死病毒ORF007基因保守區序列設計的。
3.根據權利要求1或2所述的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述針對鱖魚傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）的特異性引物及探針的序列如下所示：
ISKNV-F: 5'-CGAGGCCACATCCAACATC-3’（SEQ ID NO:1）；
ISKNV-R: 5'-CGCCTTTAACGTGGGATATATTG-3’（SEQ ID NO:2）；
ISKNV-P：5'-FAM-CACCAAACTGACCGCGGACTCGT- Eclipse-3’（SEQ ID NO:3）。
4.根據權利要求1所述的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有陽性標準品，所述陽性標準品為含有鱖傳染性脾腎壞死病毒DNA的質粒。
5.一組用于檢測鱖傳染性脾腎壞死病毒的熒光定量PCR特異性引物及探針，序列如下所述
ISKNV -F: 5'-CGAGGCCACATCCAACATC-3’（SEQ ID NO:1）；
ISKNV-R: 5'-CGCCTTTAACGTGGGATATATTG-3’ （SEQ ID NO:2）；
ISKNV-P：5'-FAM-CACCAAACTGACCGCGGACTCGT- Eclipse-3’ （SEQ ID NO:3）。
6.一種鱖傳染性脾腎壞死病毒滴度的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）以鱖魚傳染性脾腎壞死病毒ORF007基因保守區序列作為PCR擴增的靶序列，設計合成特異性引物和探針；
（2）建立質粒拷貝數與CT值對應關系的標準曲線；
（3）利用步驟（1）的特異性引物和探針對鱖魚傳染性脾腎壞死壞死病毒滴度進行熒光定量PCR檢測，根據檢測CT值，結合標準曲線計算出鱖傳染性脾腎壞死病毒滴度與拷貝數的對應關系。
7.根據權利要求6所述的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，所述特異性引物和探針的序列如下所示：
ISKNV–F：5'-CGAGGCCACATCCAACATC-3’（SEQ ID NO:1）；
ISKNV-R：5'-CGCCTTTAACGTGGGATATATTG-3’（SEQ ID NO:2）；
ISKNV-P：5'-FAM-CACCAAACTGACCGCGGACTCGT-Eclipse-3’ （SEQ ID NO:3）。
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