[發(fā)明專利]一種利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410166272.9
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103952400A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜夢涵;李董嬌;惠杜鵑;房欣宜;崔亞麗
• 申請（專利權(quán)）人: 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安智邦專利商標(biāo)代理有限公司 61211
• 代理人: 胡樂

1.一種利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于，整個純化過程在無菌操作臺完成，包括以下步驟：

(1)裂解樣品

取待純化樣本，加入裂解液中，充分研磨至無固體組織存在的勻漿液，加入稀釋液混勻備用；所述裂解液為終濃度為2M‐8M硫氰酸胍溶液與0.01‐0.05M檸檬酸鈉的混合溶液，并在使用前以體積比25:1加入β‐巰基乙醇；

(2)形成含金磁微粒‐核酸復(fù)合物的混合溶液

取金磁微粒溶液置于一潔凈離心管中，磁性分離后去除上清液，加入結(jié)合液后與步驟(1)得到的勻漿液混合均勻，室溫下靜置使其充分結(jié)合，形成含金磁微粒‐核酸復(fù)合物的混合溶液；

(3)將金磁微粒‐核酸復(fù)合物從混合溶液中分離

對混合溶液磁性分離，棄去管內(nèi)液體，管內(nèi)的固體成分為所得到的金磁微粒‐核酸復(fù)合物；

(4)清洗

依次采用第一清洗液和第二清洗液對收集到的金磁微粒‐核酸復(fù)合物進(jìn)行清洗，其中第一清洗液是終濃度為2M‐8M氯化鋰溶液和50％(V/V)乙醇混合溶液，第二清洗液是70％‐85％(V/V)乙醇；

(5)洗脫

將洗脫液與清洗后的金磁微粒-核酸復(fù)合物混合均勻，使DNA與RNA從磁性微粒上洗脫下來，在外加磁場的作用下，將磁性微粒與洗脫下的總核酸分離，收集上清液，即為純化得到的總核酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：步驟(1)中的稀釋液為終濃度0.01M‐0.1MTris‐HCl、0.001M‐0.010M?EDTA以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％‐0.5％SSC和0.2％‐0.8％SDS的混合溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：步驟(2)中的結(jié)合液為無水乙醇。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：步驟(5)中的洗脫液為無核糖核酸酶水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：所述待純化樣本的質(zhì)量≤10mg。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：步驟(4)中采用第二清洗液進(jìn)行兩次清洗以去除鹽離子。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用金磁微粒純化動物微量組織中總核酸的方法，其特征在于：采用的金磁微粒是以磁性納米微粒為核、在核表面組裝納米金或銀粒子形成的磁性復(fù)合微粒；其中所述的磁性納米微粒包括Fe₃O₄、γ-Fe₂O₃或者單質(zhì)Fe、Co、Ni粒子聚集體、或者經(jīng)過修飾后形成的Fe與其他金屬元素形成的正鐵酸鹽粒子聚集體。

8.一種適用于動物微量組織及臨床穿刺組織樣本的總核酸純化試劑盒，其特征在于：包括分隔放置的如權(quán)利要求1中所述裂解液、稀釋液、結(jié)合液、第一清洗液、第二清洗液、金磁微粒溶液和洗脫液。