[發明專利]一種龍虎人丹植物藥血漿中的8種不揮發性成分的含量檢測方法

有效

• 申請號: 201410165641.2
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN105004799B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發明（設計）人: 丁禮琴;金家驊;杜子榮;馬越鳴;王天明
• 申請（專利權）人: 上海中華藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種龍虎人丹植物藥血漿中8種不揮發性成分含量的檢測方法，該方法由以下步驟組成：

(1)哺乳類血漿樣品預處理

將哺乳類給予龍虎人丹植物藥后的含藥血漿，加入混合標準溶液、混合內標后，加乙酸乙酯，血漿與乙酸乙酯的體積比為1∶10-15，渦旋混勻3-5分鐘，16000-20000rpm高速離心，移取上清液于另一試管中，30-40℃氮氣吹干，用流動相溶液復溶，渦旋混勻3-5分鐘，16000-20000rpm離心10-20分鐘；

按進樣量為1-20μL對Thermo Scientific Hypersil GOLD C18分析柱進樣，控制柱溫為20℃-40℃，接著用由A相和B相組成的流動相以0.2-1.5mL/min的速度按照表1的程序進行梯度洗脫，同時利用高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術檢測洗脫液，獲得供試品藥物及對照品藥物的離子色譜圖；

表1

(2)所得SMR色譜圖對應特征峰分別為兒茶素、表兒茶素、甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、胡椒堿、甘草次酸、以及內標卡馬西平、香豆素-3-羧酸，前8種待測成分分別按照回歸方程(一)-(八)的標準曲線計算含量：(一)y＝0.0081x-0.0141，(二)y＝0.0086x-0.0187，(三)y＝0.0800x-0.0111，(四)y＝0.1511x-0.0132，(五)y＝0.2829x+0.0038，(六)y＝0.5408x+0.0030，)(七)y＝0.4570x+0.0047，(八)y＝0.0057x+0.0019；

上述步驟中，

所述流動相A相為0.01-0.02％的乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中含有0.1-0.3mM乙酸銨水溶液；B相為乙腈；

實驗中質譜條件為：TSQ Quantum Ultra三重四極桿質譜儀，電噴霧離子源(HESI-II)，正離子模式，噴霧電壓分別為3000v，霧化溫度為300℃，鞘氣為40psi，輔助氣為10psi，離子傳輸毛細管溫度為300℃；負離子模式，噴霧電壓分別為-2500v，霧化溫度為300℃，鞘氣為40psi，輔助氣為10psi，離子傳輸毛細管溫度為300℃。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于用如表2所示程序代替表1進行梯度洗脫

表2

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于用如表3所示程序代替表1進行梯度洗脫

表3

4.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征在于所述梯度洗脫過程中的柱溫為40℃。

5.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述哺乳類血漿樣品的預處理過程中的氮氣溫度為35℃。

6.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述哺乳類血漿樣品的預處理過程中的離心條件18000rpm。

7.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述哺乳類血漿樣品的預處理過程中的離心條件15分鐘。

8.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述梯度洗脫過程中A相為0.01％的乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中含有0.2mM乙酸銨。

9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于使用乙酸丁酯代替哺乳類血漿樣品預處理過程中所使用的乙酸乙酯溶劑。

10.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于使用異丙醇代替哺乳類血漿樣品預處理過程中所使用的乙酸乙酯溶劑。

11.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于使用氯仿代替哺乳類血漿樣品預處理過程中所使用的乙酸乙酯溶劑。

12.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述哺乳類血漿樣品的流動相溶劑為30％的乙腈。

13.根據權利要求1～3之一所述的檢測方法，其特征所述哺乳類血漿樣品的流動相乙腈溶劑濃度為20-40％。