[發明專利]一種龍虎人丹植物藥血漿中的8種不揮發性成分的含量檢測方法

有效

• 申請號: 201410165641.2
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN105004799B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發明（設計）人: 丁禮琴;金家驊;杜子榮;馬越鳴;王天明
• 申請（專利權）人: 上海中華藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及中藥成分的含量測定方法及其質量控制方法，具體涉及龍虎人丹植物藥血漿的含量檢測法及其質量控制方法。

背景技術

龍虎人丹(國藥準字Z20025168)創制于1909年，由黃楚九先生根據古方“諸葛行軍散”化裁而來，主要由薄荷腦、丁香、肉桂、兒茶、甘草等十一味中藥構成，其功能主治為清暑開竅，辟穢排濁，驅風健胃。1923年″龍虎牌″和″人丹及圖案″商標向政府申請并獲核準，成為國內第一個規范的醫藥注冊商標，是上海乃至中國的民族制藥工業發端的標志。百年來龍虎人丹產品銷售經久不衰，成為銷售過億的獨家傳統中藥品種。

龍虎人丹于1960年批準上市，上市時間較早，缺乏藥物代謝動力學的研究，因此，對體內的藥效成分不清楚，難以為質量控制及指導臨床合理用藥提供依據，阻礙了該藥進入國際市場。

到目前為止，未見有關龍虎人丹植物藥藥物代謝動力學的研究報道，無該復方在生物樣品(包括血漿樣品)中兒茶素、表兒茶素、甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、胡椒堿、甘草次酸的測定方法。

發明內容

本發明的主要目的是利用高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術，對龍虎人丹植物藥血漿中8種不揮發性成分進行定性定量分析，確保產品質量穩定。

本發明所采用的技術方案：

一種龍虎人丹植物藥血漿中8種不揮發性成分含量的檢測方法，該方法由以下步驟組成：

(1)哺乳類血漿樣品預處理

將哺乳類給予龍虎人丹植物藥后的含藥血漿，加入混合標準溶液、混合內標后，加乙酸乙酯，血漿與乙酸乙酯的體積比為1∶10-15，渦旋混勻3-5分鐘，16000-20000rpm高速離心，移取上清液于另一試管中，30-40℃氮氣吹干，用流動相溶液復溶，渦旋混勻3-5分鐘，16000-20000rpm離心10-20分鐘。

按進樣量為1-20μL對Thermo Scientific Hypersil GOLD C18分析柱進樣，控制柱溫為20℃-40℃，接著用由A相和B相組成的流動相以0.2-1.5mL/min的速度按照表1的程序進行梯度洗脫，同時利用高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術檢測洗脫液，獲得供試品藥物及對照品藥物的離子色譜圖；

表1

(2)所得SMR色譜圖圖1對應特征峰分別為兒茶素、表兒茶素、甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、胡椒堿、甘草次酸、以及內標卡馬西平、香豆素-3-羧酸。

上述步驟中，

所述流動相A相為0.01-0.02％的乙酸(含有0.1-0.3mM乙酸銨)的水溶液；

B相為乙腈；

實驗中質譜條件為：TSQ Quantum Ultra三重四極桿質譜儀，電噴霧離子源(HESI-II)，正離子模式，噴霧電壓分別為3000v，霧化溫度為300℃，鞘氣為40psi，輔助氣為10psi，離子傳輸毛細管溫度為300℃；負離子模式，噴霧電壓分別為-2500v，霧化溫度為300℃，鞘氣為40psi，輔助氣為10psi，離子傳輸毛細管溫度為300℃。

本發明中優選的梯度洗脫程序如表2。

表2

本發明中最優選的梯度洗脫程序如表3。

表3

本發明中梯度洗脫過程中的溫柱優選40℃。

本發明中哺乳類血漿樣品的預處理過程中的氮氣溫度優選為35℃。

本發明中哺乳類血漿樣品的預處理過程中的離心條件優選18000rpm。

本發明中哺乳類血漿樣品的預處理過程中的離心條件優選15分鐘。

本發明中梯度洗脫過程中A相優選為0.01％的乙酸(含有0.2mM乙酸銨)的水溶液。

本發明中可以使用乙酸丁酯、異丙醇或氯仿代替哺乳類血漿樣品預處理過程中所使用的乙酸乙酯溶劑。

本發明中哺乳類血漿樣品預處理過程中流動相溶劑可以為30％的乙腈。

本發明中哺乳類血漿樣品預處理過程中所使用的乙腈溶劑濃度可以放寬范圍至20-40％。

準確度和精密度

8種成分分別按照表4中的標準曲線計算含量。

表4

8種成分日內和日間變異及準確度結果見表5，日內及日間RSD水平在1.80％-9.37％之間，準確度水平大于94.56％，均符合要求。

表5 8種成分的精密度和準確度

提取回收率