[發(fā)明專利]一種高穩(wěn)定性飼用液體復(fù)合酶的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410165030.8
• 申請(qǐng)日: 2014-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN103898084A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙麗芳;蘇俊兵;蔡曉龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京昕大洋科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/96
• 分類號(hào): C12N9/96;C12N9/46;C12N9/42;C12N9/16;A23K1/165
• 代理公司: 北京中建聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11004
• 代理人: 李聚

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高純度高穩(wěn)定性飼用液體復(fù)合酶的制備方法。

背景技術(shù)

酶是一種活性蛋白質(zhì)，對(duì)外部環(huán)境很敏感，在高溫、高壓下極易變性失活，目前，外援酶在家禽家畜飼料中的添加應(yīng)用發(fā)展較快，現(xiàn)有加酶飼料中顆粒飼料占有較大比重。在顆粒飼料的生產(chǎn)過程中，需要在高溫高壓蒸汽下調(diào)制后擠壓制粒之后進(jìn)入冷卻系統(tǒng)，顆粒進(jìn)入冷卻系統(tǒng)之前的料溫可達(dá)到78～90℃，高溫導(dǎo)致飼料自身的內(nèi)源酶和外添加酶的活性受到不同程度的損失。為降低酶活損失，通常采用酶的穩(wěn)定化技術(shù)和后噴涂技術(shù)，后噴涂技術(shù)作為一項(xiàng)新型的飼料加工工藝，可以有效的保護(hù)酶以及和酶性質(zhì)相似的熱敏性組分的有效性。因此，利用液體酶進(jìn)行的后噴涂技術(shù)得到良好的推廣應(yīng)用，液體酶的制備成為現(xiàn)有研究熱點(diǎn)。?

傳統(tǒng)液體復(fù)合酶的制備技術(shù)中一般采用固體發(fā)酵法，將固體發(fā)酵曲料經(jīng)傳統(tǒng)常規(guī)工藝進(jìn)行壓榨過濾后，對(duì)得到的濾清液進(jìn)行簡單處理即作為液體復(fù)合酶成品，由于各酶種的生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)條件及菌種差異等極易產(chǎn)生沉淀，復(fù)合酶穩(wěn)定性較低，使用這種液體復(fù)合酶制劑進(jìn)行噴涂時(shí)，不僅會(huì)導(dǎo)致噴霧系統(tǒng)堵塞，損壞噴涂設(shè)備，而且還對(duì)自動(dòng)化生產(chǎn)造成不便；同時(shí)，一般先將單酶混合后再進(jìn)行簡單純化，提純工藝簡單，雜質(zhì)酶無法去除，且單酶的比例不易控制，不能靈活按照需要進(jìn)行任意比例的復(fù)配。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種高穩(wěn)定性飼用液體復(fù)合酶的制備方法，解決現(xiàn)有飼用液體復(fù)合酶制備中采用固體發(fā)酵法得到發(fā)酵曲料、由曲料得到濾清液的處理過程簡單原始、成品復(fù)合酶穩(wěn)定性較低易沉淀、使用時(shí)易導(dǎo)致噴霧系統(tǒng)堵塞損壞噴涂設(shè)備、不僅對(duì)自動(dòng)化生產(chǎn)造成不便還造成酶活浪費(fèi)的問題；還解決現(xiàn)有多種單酶混合后再處理的工藝制作過程中成品酶的酶種組成配比不可調(diào)節(jié)、生產(chǎn)和貯存期間酶活大量損失的問題；還解決現(xiàn)有技術(shù)設(shè)備和材料投入成本高的技術(shù)問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種高穩(wěn)定性飼用液體復(fù)合酶的制備方法,其特征在于具體包括下列步驟：

A、選用高產(chǎn)單酶的工程菌株，進(jìn)行大規(guī)模液體深層工業(yè)發(fā)酵，產(chǎn)出單酶含量較高的發(fā)酵液；

B、將液體發(fā)酵產(chǎn)出的單酶發(fā)酵液過碟片離心機(jī)，得到單酶清液；

C、將單酶清液過陶瓷膜，截留殘留菌體以及比酶分子大的顆粒，收集清液得到單酶陶清液；

D、將單酶陶清液過有機(jī)膜，截留酶分子，排出小分子的雜蛋白、無機(jī)鹽和一部分水，同時(shí)使酶液濃縮，得到單酶濃縮酶液；

E、在所得單酶濃縮酶液中加離子水進(jìn)行稀釋，得到單酶稀釋酶液；

F、在所得到的單酶稀釋酶液中加入沉降劑、穩(wěn)定劑和防腐劑，并調(diào)節(jié)pH至4.4～5.5，置于玻璃鋼罐體中進(jìn)行自然沉降；

G、通過玻璃鋼罐體側(cè)壁上的清液放料口取出沉降好的單酶清液；

H、按照步驟A～G的方法制備其他單酶清液；

I、在去離子水中加入穩(wěn)定劑、防腐劑，并調(diào)節(jié)pH至4.4～5.5，得到稀釋液；

J、將步驟H中沉降好的多種單酶清液和步驟I中制備的稀釋液進(jìn)行均勻混合，至此，液體復(fù)合酶制備完成。

作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，本專利中提到的酶種范圍即所述步驟A或H中的單酶為NSP（非淀粉多糖）單酶，如木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶等，也可為植酸酶。

作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟C中陶瓷膜的孔徑范圍為0.05～0.1μm。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟D中有機(jī)膜截留小分子的分子量為8000～10000。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟E中稀釋酶液的最終稀釋濃度為：纖維素酶3000～5000U/g,其余單酶的酶活3～5萬U/g。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟F中的沉降劑為十二水合硫酸鋁鉀、硫酸鋅，其重量比為稀釋酶液:十二水合硫酸鋁鉀:硫酸鋅=100:0.5～0.6:0.3～0.5。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟F中的穩(wěn)定劑為山梨糖醇、葡萄糖、硫酸鎂和乙酸鈉，其重量比為稀釋酶液:山梨糖醇:葡萄糖:硫酸鎂:乙酸鈉=100:8～12:3～6:0.8～1.3:3～6。

進(jìn)一步的，所述步驟F中的防腐劑為苯甲酸鈉、山梨酸鉀、卡松和氯化鈉，其重量比為稀釋酶液:苯甲酸鈉:山梨酸鉀:卡松:氯化鈉=100:0.1～0.25:0.4～0.6:0.15-0.25:10～14。