[發明專利]一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法

有效

• 申請號: 201410165030.8
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103898084A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 趙麗芳;蘇俊兵;蔡曉龍
• 申請（專利權）人: 北京昕大洋科技發展有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/46;C12N9/42;C12N9/16;A23K1/165
• 代理公司: 北京中建聯合知識產權代理事務所 11004
• 代理人: 李聚

1.一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法,其特征在于具體包括下列步驟：

選用高產單酶菌株進行大規模液體深層工業發酵，產出單酶含量較高的發酵液；

將步驟A液體發酵產出的發酵液過碟片離心機，得到單酶的酶清液；

將單酶的酶清液過陶瓷膜，截留殘留菌體和比酶分子大的顆粒，收集清液得到單酶陶清液；

將單酶陶清液過有機膜，截留酶分子，排出小分子的雜蛋白、無機鹽和部分水，使酶液濃縮，得到單酶濃縮酶液；

在所得單酶濃縮酶液中加去離子水進行稀釋，得到單酶的稀釋酶液；

在所得單酶的稀釋酶液中加入沉降劑、穩定劑和防腐劑，并調節pH至4.4～5.5，置于玻璃鋼罐體中進行自然沉降；

通過玻璃鋼罐體側壁上的清液放料口取出沉降好的單酶清液，放置備用；

按照步驟A～G的方法制備出生產飼用液體復合酶所需要的幾種單酶清液；

在去離子水中加入穩定劑、防腐劑，并調節pH至4.4～5.5，得到稀釋液；

將步驟H中沉降好的多種單酶清液和步驟I中制備的稀釋液進行均勻混合，單酶清液與稀釋液的混合比例根據實際酶活和酶種類的需要進行配比，至此，液體復合酶制備完成。

2.根據權利要求1所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟A或H中的單酶為非淀粉多糖單酶或植酸酶。

3.根據權利要求2所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟C中陶瓷膜的孔徑范圍為0.05～0.1μm。

4.根據權利要求2所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟D中有機膜截留小分子的分子量為8000～10000。

5.根據權利要求2所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟E中稀釋酶液的最終稀釋濃度為：纖維素酶3000～5000U/g,其他種類單酶的酶活為3～5萬U/g。

6.根據權利要求1所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟F中的沉降劑為十二水合硫酸鋁鉀、硫酸鋅，其添加量為重量比稀釋酶液:十二水合硫酸鋁鉀:硫酸鋅=100:0.5～0.6:0.3～0.5。

7.根據權利要求1所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟F中的穩定劑為山梨糖醇、葡萄糖、硫酸鎂和乙酸鈉，其添加量為重量比稀釋酶液:山梨糖醇:葡萄糖:硫酸鎂:乙酸鈉=100:8～12:3～6:0.8～1.3:3～6。

8.根據權利要求1所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟F中的防腐劑為苯甲酸鈉、山梨酸鉀、卡松和氯化鈉，其添加量為重量比稀釋酶液:苯甲酸鈉:山梨酸鉀:卡松:氯化鈉=100:0.1～0.25:0.4～0.6:0.15-0.25:10～14。

9.根據權利要求1所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟I中的穩定劑為山梨糖醇、葡萄糖、硫酸鎂和乙酸鈉，其添加量為重量比去離子水:山梨糖醇:葡萄糖:硫酸鎂:乙酸鈉=100:8～12:3～6:0.8～1.3:3～6。

10.根據權利要求1～9所述的一種高穩定性飼用液體復合酶的制備方法，其特征在于：所述步驟I中的防腐劑為苯甲酸鈉、山梨酸鉀、卡松和氯化鈉，其添加量為重量比去離子水:苯甲酸鈉:山梨酸鉀:卡松:氯化鈉=100:0.1～0.25:0.4～0.6:0.15～0.25:10～14。