[發明專利]一種水蛭的DNA條形碼分子鑒定方法

有效

• 申請號: 201410162545.2
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN103898235B
• 公開（公告）日: 2017-03-15
• 發明（設計）人: 李振國;陳艷明;務勇圣
• 申請（專利權）人: 牡丹江友搏藥業有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種水蛭的DNA條形碼分子鑒定方法，其特征在于采用DNA條形碼鑒定的水蛭為螞蝗Whitmania?pigra?Whitman，亦稱寬體金線蛭。

2.根據權利要求1所述的DNA條形碼分子鑒定方法，其步驟主要包括：

(1)從待測的水蛭組織中分離提取總DNA；

(2)以該DNA為模板用一對引物，通過聚合酶鏈式反應擴增出水蛭COI基因；

(3)然后取適量步驟(2)的聚合酶鏈式反應擴增出的COI基因產物用瓊脂糖電泳分離鑒定擴增產物大小，送生物公司測序；

(4)根據測序結果，進行分析比對，如果與所述基因序列SEQ?ID?NO.1的同源性在99％以上，即可判斷所述的待測組織即為寬體金線蛭來源。

3.根據權利要求2所述的引物，其特征在于引物DNA的序列為：

LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；

HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。

4.根據權利要求2所述聚合酶鏈式反應，其特征在于擴增條件為94℃預變性1分鐘，45℃退火1.5分鐘，72℃延伸1.5分鐘，5個循環；94℃變性1分鐘，50℃退火1.5分鐘，72℃延伸1分鐘，35個循環；72℃延伸5分鐘。

5.根據權利要求2所述擴增產物，其特征在于擴增片段為709bp，用1％-2％瓊脂糖電泳檢測。

6.根據權利要求2所述的一種水蛭的DNA條形碼標準檢測基因序列，其特征在于所述條形碼標準檢測基因為CO?I基因，具有如下所述的基因序列SEQ?ID?NO.1：

AAATAAATGTTGAAACAAAATAGGATCCC?CC?CCTCCTATAGGGTCAAAGAAAGTAGTATTTAAATTTCGATCTGTAAGTAATATTGTAATAGCTGCTGCTAAAACTGGTAATGATAACAATAATAAAATAGTAGTAATAACAACTGACCAAACAAATAATGGTACTCGTTCAGTTGTTATTCCTTTAGTTCGTATATTTATAATAGTCGAAATAAAATTTAATGACCCTAAAATAGATGAGGCACCAGCTATATGTAATGAAAAGATGGCTATGTCAACGGATGGGCCTGAATGAGATACGGAGTCTGATAGTGGAGGATAAAGGGTTCACCCTGCACCTACACCACCCTCAATTAAGGATGACCTAAGCAATATGATTATTGAAGGGGGTAGTAACCAAAATCTTAAGTTATTCAGACGAGGAAACGATATATCTACGGCCCCTACCATTAATGGTAGGAGTCAATTACCAAACCCACCAATTAGAATTGGTATAACTATAAAGAAGATTATAACCAACCCATGAGCCGTTACTAGTGAATTATACAATTGGTCGTCTCCAAGGAATCTTCCTGGCTGTGCTAATTCAATTCGAATAATTGATCTTATAGAAGAGCCTAACATAGCTGATCACGTTCCTAAAATAAAGTATAAAGTA。