[發明專利]一種地龍的DNA條形碼分子鑒定方法

有效

• 申請號: 201410162028.5
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN103898234A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 李振國;陳艷明;務勇圣
• 申請（專利權）人: 牡丹江友搏藥業股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種地龍的DNA條形碼分子鑒定方法，其特征在于無需對地龍品種進行形態學鑒定，可以快速、準確的鑒定藥用地龍品種。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于可以區分鑒定廣地龍和滬地龍品種。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于可以區分鑒定滬地龍，包括通俗環毛蚓、威廉環毛蚓和櫛肓毛蚓。

4.根據權利要求1所述的方法為DNA條形碼分子鑒定方法，其步驟主要包括：

(1)從待測的地龍樣品組織中分離提取基因組DNA；

(2)以步驟(1)所提取的基因組DNA為模板用一對引物，通過聚合酶鏈式反應擴增；

(3)然后取適量步驟(2)的聚合酶鏈式反應擴增出DNA產物用瓊脂糖電泳分離鑒定擴增產物大小，送生物測序公司測序；

(4)將測序結果進行拼接，與所述基因序列SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.4的同源性進行比對，同源性在99％以上，即可判斷鑒定地龍品種。

5.根據權利要求4所述的引物，其特征在于引物DNA的序列為：

LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；

HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。

6.根據權利要求4所述聚合酶鏈式反應，其特征在于擴增條件為94℃預變性1分鐘，45℃退火1.5分鐘，72℃延伸1.5分鐘，5個循環；94℃變性1分鐘，50℃退火1.5分鐘，72℃延伸1分鐘，35個循環；72℃延伸5分鐘。

7.根據權利要求4所述擴增產物，其特征在于擴增片段為709bp，用1％-2％瓊脂糖電泳檢測。

8.根據權利要求4所述的地龍DNA條形碼標準檢測基因序列，其特征在于所述條形碼標準檢測基因為COI基因，具有如下所述的廣地龍參環毛蚓基因序列SEQ?ID?NO.1：AACACTATACTTCATTTTAGGAATTTGAGCTGGAATAATTGGAGCAGGTATAAGACTCCTTATTCGAATTGAACTAAGACAACCGGGCTCATTCCTGGGCAGAGATCAACTATATAACACAATTGTCACTGCTCATGCATTCTTAATAATTTTCTTTCTAGTTATACCAGTATTCATTGGAGGATTTGGAAATTGACTTCTTCCTCTAATACTCGGAACGCCAGATATAGCATTCCCACGACTTAATAATATAAGATTTTGACTTTTACCACCCTCTCTAATTCTATTAGTATCTTCTGCCGCTGTGGAGAAAGGAGCAGGAACCGGATGAACAGTATATCCACCCCTAGCAAGAAATATTGCGCATGCTGGACCATCTGTGGACCTCGCAATTTTTTCCCTTCACTTAGCGGGGGCATCATCTATCCTTGGAGCTATCAACTTTATTACCACAGTAATTAATATACGTTGATCAGGTCTACGACTAGAACGAATTCCACTATTTGTATGAGCAGTAGTAATTACTGTAGTCCTACTACTTCTATCCCTACCAGTACTCGCGGGGGCTATTACAATACTTCTAACAGATCGAAACCTAAATACATCTTTCTTCGACCCAGCCGGTGGAGGAGATCCAATTCTATATCAACATCTATTC。