[發明專利]一種包裹有超氧化物歧化酶聚電解質微囊的制備方法

有效

• 申請號: 201410161591.0
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN105012273B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 張峰;劉進;魏建民;侯靜
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A61K9/52
• 分類號: A61K9/52;A61K38/44;A61K47/32;A61P39/06
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一種包裹有銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn?SOD)聚電解質微囊的制備方法，是基于層層自組裝原理，采用陰離子聚電解質聚苯乙烯磺酸鈉[poly(sodium styrene sulfonate)，PSS]和陽離子聚電解質聚烯丙基胺鹽酸鹽[poly(allyamine hydrochloride)，PAH]作為聚電解質微囊組裝材料，將具有抗氧化功能的Cu/Zn?SOD包裹于微囊之中，該微囊可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶類與Cu/Zn?SOD接觸，但是又不影響溶液中離子在膜內外的進出，Cu/Zn?SOD可以與體系中超氧陰離子自由基接觸，進而清除超氧陰離子自由基，在保證Cu/Zn?SOD生物活性的同時，有效防止了水解酶類對Cu/Zn?SOD的水解作用，其生物活性保存效果優于天然Cu/Zn?SOD，且無需改變酶分子表面結構、操作簡單、條件溫和、可控性強。

技術領域：

本發明涉及包裹有Cu/Zn-SOD的聚電解質微囊的制作方法。

背景技術：

作為生物體內重要的自由基清除劑，在抗氧化和防止機體衰老等方面具有重要應用價值，SOD自從被發現以來便受到國內外學者的青睞，對于SOD性質的研究也越來越深入，但是有一個關鍵問題一直困擾著研究者們，即如何更長久保持SOD生物活性的問題已經成為了人們研究的重要課題。

另外，層層自組裝技術(LBL)在制膜方面具有獨特的優勢，在醫藥學領域中，利用此技術可以制備納米級微囊，例如通過聚電解質包埋藥物，在保護藥物療效的同時，可以有效實現藥物的緩釋。

目前，國內外還沒有關于通過制備聚電解質微囊來包裹Cu/Zn-SOD，從而保護其生物活性方面的詳細報道。

發明內容：

發明目的：基于保護Cu/Zn-SOD活性的目的，利用LBL技術可以在生物大分子表面包裹聚電解質薄膜的優勢，制備納米級聚電解質微囊，包裹Cu/Zn-SOD，從而防止其被其他水解蛋白水解，進而保護其生物活性。

本發明的技術方案：發明原理如圖1所示：A為碳酸鈣與Cu/Zn-SOD共聚物，B為陽離子聚電解質聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)包裹的共聚物，C為陰離子聚電解質聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)包裹的共聚物，D為PAH/PSS多層膜包裹后的共聚物，E為溶除碳酸鈣模板后的包裹有Cu/Zn-SOD的聚電解質微囊。其中外層聚電解質多層膜為網狀結構，不影響溶液中離子的進出膜，Cu/Zn-SOD可以與體系中超氧陰離子自由基接觸，進而清除超氧陰離子自由基，發揮其抗氧化的作用。與此同時，聚電解質薄膜又能阻隔其他生物大分子進入微囊內與Cu/Zn-SOD接觸，類似胰蛋白酶等水解酶類無法與Cu/Zn-SOD接觸，從而防止了其對Cu/Zn-SOD的水解作用，因此該微囊的制備可以達到在不影響Cu/Zn-SOD發揮其生物活性的同時，又能對Cu/Zn-SOD起到很好的保護作用的目的。

一、一種包裹有銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚電解質微囊的制備，包括碳酸鈣與Cu/Zn-SOD共聚物的制作，聚陽離子電解質PAH與聚陰離子電解質PSS的交替組裝，碳酸鈣模板的溶除。如圖1所示，經過一系列制作過程，Cu/Zn-SOD被成功包裹于聚電解質微囊內。

二、一種包裹有銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚電解質微囊的制備流程：

A、Cu/Zn-SOD與碳酸鈣納米顆粒共沉淀

取一定量的CaCl₂溶液加入離心管中，然后加入等量的Cu/Zn-SOD，靜置一會，再加入等量的Na₂CO₃溶液，立刻用移液槍吹打，混合均勻，12000rpm離心30s，棄上清，得沉淀即為碳酸鈣納米顆粒與Cu/Zn-SOD共聚物。

B、聚電解質包裹碳酸鈣納米顆粒與Cu/Zn-SOD共聚物