[發(fā)明專利]一種食源性致病菌DNA的階段控溫快速提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410161363.3 | 申請日： | 2014-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN104059906A | 公開（公告）日： | 2014-09-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 熊曉輝;熊麗莎;陸利霞;程月花;游京晶 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/42;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 211816 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 食源性 致病菌 dna 階段 快速 提取 方法 | ||
1.一種食源性致病菌DNA的階段控溫快速提取方法，該方法包括如下步驟：
(a)取1-5mL食源性致病菌培養(yǎng)液，8000-12000rmp離心1-4min，使細菌細胞沉淀，棄上清；
(b)往步驟(a)制得的菌體沉淀中加入100-500uL無菌雙蒸水，充分混合，8000-12000rmp離心1-4min，棄上清；
(c)往步驟(b)制得的細菌沉淀中加入100-500uL細胞裂解液，懸浮細菌沉淀，并于105℃-126℃油浴10s-3min；
(d)將步驟(c)所得的混合液立即移至70℃-95℃中水浴5-30min；
(e)步驟(d)結(jié)束后，8000-12000rmp離心1-4min取上清，上清液即為模板DNA，對提取所得DNA用于分析檢測，剩余DNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌包括金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌、單核增生李斯特菌、副溶血性弧菌等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟(a)中，細胞培養(yǎng)液為取食品樣品10-25g(mL)或致病菌菌株至適宜液體培養(yǎng)基，于最適培養(yǎng)溫度培養(yǎng)12-20h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟(c)中，細胞裂解液為：0-10％chelex-100水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟(e)中所述對DNA進行分析檢測，其特征在于，所述的DNA濃度通過瓊脂糖凝膠電泳或測定OD260，OD260/OD280比值得到。所得致病菌DNA濃度在50-400ng/uL，所得的DNA純度OD260/OD280比值為1.6-1.8；且所得的DNA質(zhì)量可以滿足普通PCR、熒光PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增等檢測方法的要求。
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