[發明專利]一種羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410160855.0
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN104017776A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 劉湘濤;王光祥;尚佑軍;張志東;王艷華;黎攝兒;田宏;吳錦艷;陳妍;逯忠新
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/275;A61K47/46;A61P31/20
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及一種弱毒疫苗及其制備方法和應用，特別涉及一種羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗及其制備方法和應用，本發明屬于獸醫生物制品領域。

背景技術

羊傳染性膿皰病(Contagious?ecthyma,CE)又名羊傳染性膿皰性皮炎(Contagious?pustular?dermatitis)，俗稱“羊口瘡(Orf)”，是由是由副痘病毒成員羊傳染性膿皰病毒(Orf?virus,ORFV)感染引起山羊、綿羊和人的一種急性、接觸性和嗜上皮性的的人獸共患傳染病,以在患羊的口唇、蹄、乳房、外陰等處皮膚和黏膜形成紅斑、丘疹、膿瘡、潰瘍和疣狀厚痂為特征。世界動物衛生組織(OIE)將該病列為需申報類動物疾病，我國將其列為一類動物疫病。

該病最早發現于歐洲，目前，幾乎在所有養羊國家和地區均存在。自然情況下主要侵害綿羊和山羊，山羊較為多發。此外，駱駝、牛、鹿、麝牛、貓、幼犬、猴和人均有易感性。本病常呈群發性流行的趨勢，3～6月齡羔羊最易感染，常引起群體發病，尤其是飼養密集的羊群。范春玲等報道了我國2006年在北京市亞福動物養殖中心暴發該病，該病傳播速度快，發病率高達95.4％。近年來隨著肉羊產業的發展和羊頻繁流動，該病時有發生，甚至在一些大型種羊場都有該病的流行，給養羊業帶來了巨大的經濟損失，嚴重危害肉羊產業的健康發展。更為嚴重的是，此病可以通過傷口感染飼養人員，感染者表現為手背、指間和前臂部皰疹和破潰。例如2005年8月福建省永安市有8名羊場養殖工人因感染羊傳染性膿皰病毒而發病。可見，羊傳染性膿皰不但嚴重危害肉羊產業的健康發展，而且威脅人類的身體健康，是一種危害較為嚴重的人畜共患傳染病。

目前，羊口瘡流行地區尚無有效的治療方法，所以，免疫接種成為了防控該病唯一有效的方法。爆發該病時許多基層養殖人員直接取病羊的痂皮研磨后與鹽水混合制成自家疫苗對未感染羊只進行接種；雖然該方法能在一定程度上控制病情的發，展，但是卻具有散布強毒的危險。目前疫苗的發展和應用主要集中在常規疫苗，如滅活疫苗和細胞弱毒疫苗，以及新型疫苗，如囊膜亞單位疫苗、核酸疫苗和重組疫苗上。但是目前，ORFV新型疫苗的研制還處于試驗階段，且新型疫苗往往制備過程繁瑣、技術要求高，應用于臨床還有很長一段路要走。滅活疫苗雖然國內外學者均有研究，但其免疫效果有限，從未真正應用于臨床。目前，在臨床上應用較為廣泛的仍然是ORFV弱毒疫苗，因為它具有用量少，能誘導機體產生較強的細胞免疫和體液免疫能力，且產生免疫保護力的時間持久的特點。在國內，雖然羊口瘡弱毒疫苗在青海省畜牧獸醫科學院獸醫研究所和甘肅省畜牧獸醫研究所均有研制，但其弱毒都是上世紀80年代前后的毒株，目前國內流行毒可能發生變異，很難保證其免疫的有效性。

本發明選用分離獲得的ORFV湖北通山縣分離毒株作為疫苗研制的候選毒株，利用牛睪丸支持細胞系傳代致弱，培育出符合“獸用新生物制品質量標準”的ORFV弱毒疫苗株，配比一定比例的耐熱凍干保護劑制備凍干弱毒疫苗，攻毒保護試驗結果顯示所制備的ORFV細胞弱毒疫苗能夠產生有效的免疫保護力。因此，本發明利用ORFV流行毒株研制安全高效的弱毒疫苗對于該病的防治具有重要的現實意義。

發明內容

針對現有羊傳染性膿皰弱毒疫苗的不足，本發明的目的在于提供一種羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗及其制備方法，以實現用簡單實用的制備方法生產出產量高、穩定性好、成本低、并且安全可靠的疫苗。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

2009年11月中旬，湖北省通山縣某羊場有300多只1月～3月齡黑山羊羔羊發病，發病率達80％，主要表現為典型的口瘡癥狀，經多種抗生素和驅蟲藥治療無效，1周后有40多只病羊死亡。本發明發明人通過對該病料進行病例復制、病毒分離，最終得到一株病毒株，經病毒理化特性鑒定、針對羊傳染性膿皰病毒B2L基因的特異性PCR檢測及測序證明分離得到的病毒株該病原為羊傳染性膿皰病毒病毒(王光祥等，湖北省羊口瘡病毒的分離鑒定，動物醫學進展，2012，33(11)：37－40)，并將該病毒命名為Orf?Virus?HB-TS09株，簡稱ORFV/HB/09株。