[發明專利]一種羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410160855.0
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN104017776A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 劉湘濤;王光祥;尚佑軍;張志東;王艷華;黎攝兒;田宏;吳錦艷;陳妍;逯忠新
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/275;A61K47/46;A61P31/20
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒，命名為羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒Orf?Virus?HB-TS09F65株，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏時間為2014年3月19日，保藏編號為CCTCC?NO：V201406。

2.權利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒在制備羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗中的應用。

3.一種羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗，其特征在于有效成分為權利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒或其傳代毒。

4.一種制備權利要求3所述的羊傳染性膿皰病毒細胞弱毒疫苗的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)病毒抗原的制備

選生長良好布滿單層的新生牛睪丸原代細胞，傾去營養液，按原營養液體積的1-10％接種權利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒或其傳代毒的病毒液，吸附5-15分鐘后加DMEM維持液，調PH至7.0～7.2，加青霉素、鏈霉素各100單位/ml，于37℃、5％CO2濃度培養箱中進行培養；培養40～72h，細胞病變達到75％以上時收獲病毒，置-20℃冰箱反復凍融兩次，然后進行無菌檢驗、安全檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗，達到《中華人民共和國獸醫生物制品質量標準》中規定的各項指標，且病毒滴度不低于10⁶TCID₅₀/0.1ml時，作為羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒抗原，備用；

(2)疫苗的配制和凍干

將步驟(1)制備的各項指標都合格的羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒抗原與耐熱凍干保護劑以體積比1︰1的比例混勻后，以2mL/瓶無菌條件下封裝于鏈瓶內，在低溫冷凍干燥機內進行凍干，即為成品弱毒疫苗，將其在2℃-8℃下保存。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，按原營養液體積的5％接種權利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細胞傳代致弱毒的病毒液，吸附10分鐘后加DMEM維持液，調PH至7.0～7.2，加青霉素、鏈霉素各100單位/ml，于37℃、5％CO2濃度培養箱中進行培養。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述耐熱凍干保護劑中含有海藻糖30～70g/L，脫脂奶粉10～30g/L，聚乙烯吡咯烷酮10～30g/L，明膠5～15g/L，精氨酸0.5～4g/L，維生素C1～5g/L，剩余成分為超純水。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述耐熱凍干保護劑中含有海藻糖50g/L，脫脂奶20g/L，聚乙烯吡咯烷酮20g/L，明膠10g/L，精氨酸1.5g/L，維生素C2.5g/L，剩余成分為超純水。