[發(fā)明專利]一種羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞弱毒疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410160855.0
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN104017776A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉湘濤;王光祥;尚佑軍;張志東;王艷華;黎攝兒;田宏;吳錦艷;陳妍;逯忠新
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/275;A61K47/46;A61P31/20
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒，命名為羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒Orf?Virus?HB-TS09F65株，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時間為2014年3月19日，保藏編號為CCTCC?NO：V201406。

2.權(quán)利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒在制備羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞弱毒疫苗中的應(yīng)用。

3.一種羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞弱毒疫苗，其特征在于有效成分為權(quán)利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒或其傳代毒。

4.一種制備權(quán)利要求3所述的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞弱毒疫苗的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)病毒抗原的制備

選生長良好布滿單層的新生牛睪丸原代細(xì)胞，傾去營養(yǎng)液，按原營養(yǎng)液體積的1-10％接種權(quán)利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒或其傳代毒的病毒液，吸附5-15分鐘后加DMEM維持液，調(diào)PH至7.0～7.2，加青霉素、鏈霉素各100單位/ml，于37℃、5％CO2濃度培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)40～72h，細(xì)胞病變達(dá)到75％以上時收獲病毒，置-20℃冰箱反復(fù)凍融兩次，然后進(jìn)行無菌檢驗、安全檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗，達(dá)到《中華人民共和國獸醫(yī)生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的各項指標(biāo)，且病毒滴度不低于10⁶TCID₅₀/0.1ml時，作為羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒抗原，備用；

(2)疫苗的配制和凍干

將步驟(1)制備的各項指標(biāo)都合格的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒抗原與耐熱凍干保護(hù)劑以體積比1︰1的比例混勻后，以2mL/瓶無菌條件下封裝于鏈瓶內(nèi)，在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干，即為成品弱毒疫苗，將其在2℃-8℃下保存。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，按原營養(yǎng)液體積的5％接種權(quán)利要求1所述的羊傳染性膿皰病毒細(xì)胞傳代致弱毒的病毒液，吸附10分鐘后加DMEM維持液，調(diào)PH至7.0～7.2，加青霉素、鏈霉素各100單位/ml，于37℃、5％CO2濃度培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述耐熱凍干保護(hù)劑中含有海藻糖30～70g/L，脫脂奶粉10～30g/L，聚乙烯吡咯烷酮10～30g/L，明膠5～15g/L，精氨酸0.5～4g/L，維生素C1～5g/L，剩余成分為超純水。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述耐熱凍干保護(hù)劑中含有海藻糖50g/L，脫脂奶20g/L，聚乙烯吡咯烷酮20g/L，明膠10g/L，精氨酸1.5g/L，維生素C2.5g/L，剩余成分為超純水。