[發明專利]一種用于獲得無標記轉基因植物的農桿菌轉化載體組合物及其應用

有效

• 申請號: 201410160278.5
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN103966257A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 夏蘭琴;王根平;杜文明;孫永偉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于獲得無標記轉基因植物的農桿菌專用載體組合物，由獨立包裝的重組載體和pClean系列載體的pClean-Soup載體組成；

所述重組載體為將目的基因和標記基因插入pClean系列載體的pClean-Green載體2個不同的T-DNA區中，得到表達所述目的基因和標記基因的重組載體。

2.根據權利要求1所述的載體組合物，其特征在于：

所述目的基因通過通過gatway重組到pClean系列載體的pClean-Green載體的T-DNA區；

所述標記基因以兩端分別融合2LB和RB的DNA分子的形式插入pClean系列載體的pClean-Green載體的酶切位點間，形成另一個含有標記基因的T-DNA區。

3.根據權利要求1或2所述的載體組合物，其特征在于：

所述pClean-Green載體為pCG181或pCG185；所述pClean-Green載體具體為pCG185；

所述pClean-Soup載體為pAL154。

4.根據權利要求3所述的載體組合物，其特征在于：

所述目的基因為GUS基因，所述標記基因為bar基因。

5.根據權利要求4所述的載體組合物，其特征在于：

所述gus基因以gus表達盒的形式插入所述pClean-Green載體中；所述gus表達盒包括啟動子ubi、gus基因和終止子Nos；

所述兩端分別融合2LB和RB的DNA分子包括LB、第二個LB、啟動子ubi、bar基因、終止子Nos和RB。

6.根據權利要求1-5中任一所述的載體組合物，其特征在于：

所述DNA分子的核苷酸序列為序列表中序列1自5’末端第1-3149位所示的核苷酸；

所述gus表達盒的核苷酸序列為序列表中序列2所示的核苷酸。

7.權利要求1-6中任一所述的載體組合物在鑒定或培育無標記轉基因植物中的而應用；

所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；

所述單子葉植物具體為小麥。

8.一種用于獲得無標記轉基因植物的方法，包括如下步驟：

1）將權利要求1-6中任一所述的載體組合物中的重組載體和pClean-Soup載體共轉染到植物外植體中，得到T0代轉基因植物；

2）從T0代轉基因植物中選取目的基因和標記基因共表達的T0代轉基因植物，進行播種，收獲T1代轉基因植物；

3）選取所述T1代轉基因植物中無標記基因表達且有目的基因表達的植株，得到無標記轉基因植株。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述植物外植體為胚；

所述目的基因為gus基因，所述標記基因為bar基因。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于：

所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；

所述單子葉植物具體為小麥。