[發(fā)明專利]一種肝素含量的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410159017.1
• 申請(qǐng)日: 2014-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN104048931A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙鐵銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海貞元診斷用品科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種肝素含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

肝素(heparin)是一種糖胺聚糖，是被廣泛應(yīng)用的抗凝血藥物。肝素是由D-葡糖胺、L-艾杜糖醛酸、N-乙酰葡糖胺及葡糖醛酸交替組成的粘多糖硫酸酯，分子量從5至30KDa，其中硫酸根約占40%。肝素的抗凝血功能主要是通過它與抗凝血酶的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的。抗凝血酶III（AT-III）的精氨酸酶活性部位可以與含絲氨酸的凝血酶和凝血因子XIIa、XIa、Xa、IXa的絲氨酸酶活性部位結(jié)合，形成無凝血活性的抗凝血酶III-凝血因子復(fù)合物，而達(dá)到抗凝血作用。肝素帶有大量負(fù)電荷，能與抗凝血酶III上帶正電荷的賴氨酸結(jié)合，肝素中獨(dú)特的戊聚糖序列，就是肝素與抗凝血酶III的結(jié)合位點(diǎn)。肝素與抗凝血酶III結(jié)合，使抗凝血酶III發(fā)生分子構(gòu)象變化，暴露精氨酸活性部位，增加與凝血因子中絲氨酸接觸的概率，使反應(yīng)速率增加約1000倍，從而增強(qiáng)抗凝血酶III的抗凝血活性。

肝素作為臨床醫(yī)學(xué)中一種最常用的抗凝治療劑，使用肝素時(shí)要精確把握肝素用量，以避免出現(xiàn)用量過少達(dá)不到抗凝效果，用量過多又會(huì)引起自發(fā)性出血的狀況，保持機(jī)體出凝血功能有效平衡。但是，由于肝素是一種高度帶負(fù)電荷的異質(zhì)性混合物，容易與血液中帶正電荷的蛋白非特異性結(jié)合，導(dǎo)致難以計(jì)算與抗凝血酶III特異性結(jié)合的肝素含量。因此，在臨床應(yīng)用中，必須通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝素抗凝的實(shí)際效果從而得出肝素的最佳劑量。

常見的應(yīng)用于臨床的肝素有普通未分級(jí)肝素(Unfractionated?heparin,?UFH)，低分子量肝素(low-molecular-weight?heparin,?LMWH)和磺達(dá)肝素(fondaparinux)。普通未分級(jí)肝素的平均分子量是?15000。低分子量肝素的平均分子量是?4000?到6500。而磺達(dá)肝素是化學(xué)合成的戊聚糖化合物，它的分子量為?1728，基本上由與抗凝血酶結(jié)合的戊聚糖序列組成。普通未分級(jí)肝素既可抑制抗凝血酶也可抑制活化因子X，低分子量肝素則主要抑制活化因子X。磺達(dá)肝素只能抑制活化因子X，而不能抑制抗凝血酶。

普通未分級(jí)肝素價(jià)格相對(duì)低廉，是最早應(yīng)用到臨床的肝素。它是一種帶大量負(fù)電荷的異質(zhì)性的混合物。在血液里，它和帶正電荷的蛋白非特異性結(jié)合，因此有多少肝素和抗凝血酶特異性結(jié)合很難計(jì)算。這樣，普通未分級(jí)肝素的用量難以預(yù)測(cè)，用量過少達(dá)不到抗凝效果，用量過多又會(huì)導(dǎo)致出血。所以在臨床應(yīng)用中，必須通過實(shí)驗(yàn)室的嚴(yán)格監(jiān)測(cè)來測(cè)量肝素抗凝的實(shí)際效果來找到并維持最佳劑量。

低分子量肝素比普通未分級(jí)肝素的糖鏈要短很多。這樣就減少了許多與血液中蛋白的非特異結(jié)合。因此，它在血液中的半衰期比普通未分級(jí)肝素要長，抗凝血效果也更容易預(yù)測(cè)，由于和血小板作用引起的副作用也降低。磺達(dá)肝素雖然價(jià)格相對(duì)昂貴，但它基本上由與抗凝血酶結(jié)合的戊聚糖序列組成，所以它的特異性更強(qiáng)，在血液中的半衰期也更長。

然而，低分子量肝素和磺達(dá)肝素在臨床應(yīng)用中，由于病人的體質(zhì)，性別，年齡，體重，用藥等的不同，也會(huì)出現(xiàn)藥量不足或過量的情況。因此，為了避免引起出血和對(duì)病人實(shí)施個(gè)體化治療，實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)必不可少。

現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于測(cè)定肝素含量的方法有多種。其中，臨床中常用活化部分凝血活酶時(shí)間?(activated?partial?thromboplastin?time,?APTT)?常用來間接反映肝素治療是否恰當(dāng)，其基本操作是在血漿中加入鈣離子，腦磷脂和其他激活物質(zhì)如白陶土，這些物質(zhì)激活內(nèi)源性凝血級(jí)聯(lián)系統(tǒng)，促進(jìn)血漿凝固，而活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)就是血漿凝固所需的時(shí)間。肝素的用量可以根據(jù)APTT時(shí)間的長短來進(jìn)行調(diào)整，從而找到最佳劑量范圍。APTT是一種凝固法。作為檢測(cè)肝素的方法之一，它操作簡單、快速、便宜。然而，通過活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）推測(cè)肝素最佳劑量范圍的方法，在臨床實(shí)踐中經(jīng)常被質(zhì)疑，尤其是對(duì)低分子量肝素和磺達(dá)肝素的應(yīng)用。主要是因?yàn)槔眠@種方法得出的肝素最佳劑量也常常出現(xiàn)血栓和出血現(xiàn)象，而且應(yīng)用此法時(shí)，患者需要多次檢測(cè)、調(diào)整肝素劑量。因此，活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）并不是一個(gè)能被用來準(zhǔn)確推測(cè)的肝素最佳劑量范圍的指標(biāo)。并且，活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)只能用于普通肝素檢測(cè)，不能用于低分子肝素和磺達(dá)肝素檢測(cè)。