[發(fā)明專利]一種FXa活性檢測試劑及其制備方法和應用

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• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN104062243A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設計）人: 趙鐵銘
• 申請（專利權(quán)）人: 上海貞元診斷用品科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種FXa活性檢測試劑及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

肝素(heparin)是一種糖胺聚糖，是被廣泛應用的抗凝血藥物。肝素是由D-葡糖胺、L-艾杜糖醛酸、N-乙酰葡糖胺及葡糖醛酸交替組成的粘多糖硫酸酯，分子量從5至30KDa，其中硫酸根約占40%。肝素的抗凝血功能主要是通過它與抗凝血酶的結(jié)合來實現(xiàn)的。抗凝血酶III（AT-III）的精氨酸酶活性部位可以與含絲氨酸的凝血酶和凝血因子XIIa、XIa、Xa、IXa的絲氨酸酶活性部位結(jié)合，形成無凝血活性的抗凝血酶III-凝血因子復合物，而達到抗凝血作用。肝素帶有大量負電荷，能與抗凝血酶III上帶正電荷的賴氨酸結(jié)合，肝素中獨特的戊聚糖序列，就是肝素與抗凝血酶III的結(jié)合位點。肝素與抗凝血酶III結(jié)合，使抗凝血酶III發(fā)生分子構(gòu)象變化，暴露精氨酸活性部位，增加與凝血因子中絲氨酸接觸的概率，使反應速率增加約1000倍，從而增強抗凝血酶III的抗凝血活性。

肝素作為臨床醫(yī)學中一種最常用的抗凝治療劑，使用肝素時要精確把握肝素用量，以避免出現(xiàn)用量過少達不到抗凝效果，用量過多又會引起自發(fā)性出血的狀況，保持機體出凝血功能有效平衡。但是，由于肝素是一種高度帶負電荷的異質(zhì)性混合物，容易與血液中帶正電荷的蛋白非特異性結(jié)合，導致難以計算與抗凝血酶III特異性結(jié)合的肝素含量。因此，在臨床應用中，必須通過實驗檢測肝素抗凝的實際效果從而得出肝素的最佳劑量。

常見的應用于臨床的肝素有普通未分級肝素(Unfractionated heparin, UFH)，低分子量肝素(low-molecular-weight heparin, LMWH)和磺達肝素(fondaparinux)。普通未分級肝素的平均分子量是 15000。低分子量肝素的平均分子量是 4000 到6500。而磺達肝素是化學合成的戊聚糖化合物，它的分子量為 1728，基本上由與抗凝血酶結(jié)合的戊聚糖序列組成。普通未分級肝素既可抑制抗凝血酶也可抑制活化因子X，低分子量肝素則主要抑制活化因子X。磺達肝素只能抑制活化因子X，而不能抑制抗凝血酶。

普通未分級肝素價格相對低廉，是最早應用到臨床的肝素。它是一種帶大量負電荷的異質(zhì)性的混合物。在血液里，它和帶正電荷的蛋白非特異性結(jié)合，因此有多少肝素和抗凝血酶特異性結(jié)合很難計算。這樣，普通未分級肝素的用量難以預測，用量過少達不到抗凝效果，用量過多又會導致出血。所以在臨床應用中，必須通過實驗室的嚴格監(jiān)測來測量肝素抗凝的實際效果來找到并維持最佳劑量。

低分子量肝素比普通未分級肝素的糖鏈要短很多。這樣就減少了許多與血液中蛋白的非特異結(jié)合。因此，它在血液中的半衰期比普通未分級肝素要長，抗凝血效果也更容易預測，由于和血小板作用引起的副作用也降低。磺達肝素雖然價格相對昂貴，但它基本上由與抗凝血酶結(jié)合的戊聚糖序列組成，所以它的特異性更強，在血液中的半衰期也更長。

然而，低分子量肝素和磺達肝素在臨床應用中，由于病人的體質(zhì)，性別，年齡，體重，用藥等的不同，也會出現(xiàn)藥量不足或過量的情況。因此，為了避免引起出血和對病人實施個體化治療，實驗室的監(jiān)測必不可少。

現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于測定肝素含量的方法有多種。其中，臨床中常用活化部分凝血活酶時間 (activated partial thromboplastin time, APTT) 常用來間接反映肝素治療是否恰當，其基本操作是在血漿中加入鈣離子，腦磷脂和其他激活物質(zhì)如白陶土，這些物質(zhì)激活內(nèi)源性凝血級聯(lián)系統(tǒng)，促進血漿凝固，而活化部分凝血活酶時間(APTT)就是血漿凝固所需的時間。肝素的用量可以根據(jù)APTT時間的長短來進行調(diào)整，從而找到最佳劑量范圍。APTT是一種凝固法。作為檢測肝素的方法之一，它操作簡單、快速、便宜。然而，通過活化部分凝血活酶時間（APTT）推測肝素最佳劑量范圍的方法，在臨床實踐中經(jīng)常被質(zhì)疑，尤其是對低分子量肝素和磺達肝素的應用。主要是因為利用這種方法得出的肝素最佳劑量也常常出現(xiàn)血栓和出血現(xiàn)象，而且應用此法時，患者需要多次檢測、調(diào)整肝素劑量。因此，活化部分凝血活酶時間（APTT）并不是一個能被用來準確推測的肝素最佳劑量范圍的指標。并且，活化部分凝血活酶時間(APTT)只能用于普通肝素檢測，不能用于低分子肝素和磺達肝素檢測。