[發(fā)明專利]一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410156956.0
• 申請日: 2014-04-18
• 公開（公告）號: CN103947609A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周洪旭;譚秀梅;孫立寧;趙川德
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;G01N1/28;G01N21/84;A01N1/00
• 代理公司: 北京一格知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11316
• 代理人: 陳真

1.一種蘋果綿蚜蠟腺孔觀察方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）樣本采集：于5～6月份蘋果綿蚜危害期，選剪帶有蘋果綿蚜的枝條，剪下蘋果葉僅留有葉柄，將處理好的蘋果枝插入裝有三分之二水的1000mL燒杯中，用紗布把燒杯口封住，放于陰涼通風(fēng)處備用；

（2）蘋果綿蚜初處理：選取一個(gè)蘋果綿蚜蟲落，將覆蓋在蟲落上的綿絮去掉，用毛筆將蟲落掃至培養(yǎng)皿中于解剖鏡下分辯齡期，用體積濃度為70-90%酒精反復(fù)沖洗蘋果綿蚜3次，然后將各齡期蘋果綿蚜分別放入指形管中，用體積濃度為70-80%酒精浸漬24小時(shí)以上待用；

（3）蘋果綿蚜脫脂處理：將步驟2中不同齡期的蘋果綿蚜從指形管中取出，用昆蟲針在其腹部扎一小孔后于體積濃度為70-80%酒精中浸泡24-48h后沖洗干凈，再于質(zhì)量濃度為8-15%的氫氧化鈉溶液中恒溫靜置至蟲體發(fā)白透明，蒸餾水清洗后再次在腹部扎另一小孔，于體積濃度為70-80%酒精溶液中再次靜置至蟲體透明；

（4）蘋果綿蚜玻片標(biāo)本的制作：取步驟3中透明的蟲體放于凹玻片上，用蒸餾水沖洗3-5次，吸水紙將水吸凈后用染色劑染色5-15分鐘，再用蒸餾水將染色劑沖洗干凈；蟲體經(jīng)整姿、干燥靜置、壓片、去泡透明后放于標(biāo)本盒中待用；

（5）玻片標(biāo)本觀察及數(shù)據(jù)處理：挑選1?-4齡若蚜、成蚜玻片標(biāo)本各5枚，于雙目實(shí)體顯微鏡下觀察其蠟腺孔和小孔的數(shù)目及其分布規(guī)律，記錄數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行處理并利用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的清洗蘋果綿蚜用的酒精濃度為75%；所述的浸泡酒精的濃度為75%，浸泡時(shí)間為24-48h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的毛筆為小號、軟毛毛筆；步驟3中，所述的昆蟲針為零號昆蟲針。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3所述的脫脂處理過程包括以下步驟：??

（a）將已分好齡期的蘋果綿蚜從指形管中取出，用零號昆蟲針在其腹部扎一小孔，然后再放到盛有75%酒精溶液的指形管中靜置24-48h備用；

（b）浸泡結(jié)束后，將蘋果綿蚜從酒精溶液中取出，并用蒸餾水在培養(yǎng)皿中沖洗2-3次；

（c）將蘋果綿蚜分齡期浸泡于濃度為10%的氫氧化鈉溶液中，并置于37℃的恒溫箱中放置36-48h至蟲體發(fā)白透明；

（d）將蘋果綿蚜從氫氧化鈉溶液中取出，用蒸餾水清洗3次，并再次用零號昆蟲針在其腹部扎另一小孔；然后將蘋果綿蚜按齡期轉(zhuǎn)移到裝有75%酒精溶液的指形管中，再次靜置至透明為止。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4中所述的標(biāo)本制作過程包括以下步驟：

（a）清洗：從指形管中取出已脫脂較好即蟲體透明的蘋果綿蚜，放于凹玻片上，用蒸餾水沖洗3-5次將酒精溶液漂洗干凈；

（b）染色：將蘋果綿蚜放到凹載玻片上，用吸水紙將水吸凈，使用染色劑染色5-15分鐘后，用蒸餾水將染色劑沖洗干凈；

（c）整姿：用吸管吸取一頭已染色的蘋果綿蚜，將其放置到載玻片上，并加一滴蒸餾水，然后將玻片放到雙目實(shí)體解剖鏡下，用零號昆蟲針對蟲體整姿；

（d）干燥：用吸水紙沿蟲體整姿方向?qū)⑺?，再將蟲體靜置5min；

（e）壓片：用霍氏封固劑制作壓片；

（f）去泡透明：將制好的玻片放于酒精燈外焰處，加熱約30-50秒，烘干至霍氏封固劑凝固并將玻片中的氣泡趕走；

（g）放置標(biāo)本盒內(nèi)保存待用：先將玻片平放，待封固劑完全干了之后再插入標(biāo)本盒中。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟b中，所述的染色劑為亮綠，質(zhì)量濃度為0.5%，染色時(shí)間為10分鐘。