[發明專利]一種用于雙表位展示的噬菌體載體及其構建方法

有效

• 申請號: 201410155216.5
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN105018507B
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 王麗;鞠志剛;高翔
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12N7/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種用于雙表位展示的噬菌體載體及其構建方法。本發明所提供的用于雙表位展示的噬菌體載體，為含有源自絲狀噬菌體的用于展示外源肽的pⅢ蛋白和pⅧ蛋白的編碼基因的環形載體。本發明首次將噬菌體pⅢ展示系統和pⅧ展示系統整合到一起，形成了噬菌體pⅢ和pⅧ雙表位展示系統，可以在同一噬菌體的pⅢ蛋白和pⅧ蛋白上展示不同的外源多肽，從而豐富了噬菌體展示系統的種類，并為其生物學和醫學應用提供了新的工具和方法。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種用于雙表位展示的噬菌體載體及其構建方法。

背景技術

噬菌體展示技術就是指以噬菌體為載體，將外源基因插入到噬菌體的基因組中，并伴隨著噬菌體基因組的表達而表達，在噬菌體自我組裝時，外源基因所表達的蛋白或多肽作為外殼蛋白的一部分，以融合蛋白的形式被展示到噬菌體的表面。

自1985年Gorge P.Smith首次提出噬菌體展示以來，噬菌體展示技術已經得到了廣泛應用，并形成了多種噬菌體展示系統，包括pⅢ展示系統、pⅧ展示系統和pⅥ展示系統等。pⅢ蛋白是病毒的次要外殼蛋白，位于病毒顆粒的尾端，由于pⅢ蛋白的拷貝數較少，所以特異性較強，在文庫篩選時就能得到親和力較高的多肽或噬菌體。而pⅧ蛋白是絲狀噬菌體的主要外殼蛋白，位于噬菌體背部，約有2700個左右的拷貝，能夠大量展示外源多肽，但是不能展示過長的片段，否則會影響噬菌體的組裝。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種用于雙表位展示的噬菌體載體。

本發明所提供的用于雙表位展示的噬菌體載體，為含有源自絲狀噬菌體的用于展示外源肽1的pⅢ蛋白和用于展示外源肽2的pⅧ蛋白的編碼基因的環形載體。

其中，所述外源肽1和所述外源肽2既可為不同外源肽，也可為相同外源肽。

在本發明中，所述pⅢ蛋白的編碼基因源自噬菌體載體fUSE55；所述pⅧ蛋白的編碼基因源自噬菌體載體f88-4。

進一步，所述pⅢ蛋白的編碼基因為序列表中序列1的第1589-2876位；所述p Ⅷ蛋白的編碼基因為序列表中序列1的第5771-6001位。

更加具體的，本發明所提供的所述用于雙表位展示的噬菌體載體的序列為序列表中序列1。

本發明的另一個目的是提供一種制備所述用于雙表位展示的噬菌體載體的方法。

本發明所提供的制備所述用于雙表位展示的噬菌體載體的方法，具體可包括如下步驟：

（1）以噬菌體載體f88-4為模板，采用引物1和引物2進行PCR擴增，得到PCR產物（含有用于展示外源肽的pⅧ蛋白的編碼基因）；

所述引物1為根據所述噬菌體載體f88-4上酶切位點Msc I上游的序列設計的正向引物；所述引物2為根據所述菌體載體f88-4上酶切位點Sac II下游的序列設計的反向引物；

（2）用限制性內切酶Msc I和Sac II雙酶切步驟（1）所得PCR產物，將酶切產物膠回收后與經過限制性內切酶Msc I和Sac II雙酶切的噬菌體載體fUSE55的骨架片段相連，得到所述用于雙表位展示的噬菌體載體。

更加具體的，在本發明中，所述引物1為序列表中序列2所示單鏈DNA分子；所述引物2為序列表中序列3所示單鏈DNA分子。

所述用于雙表位展示的噬菌體載體在展示兩種不同外源肽中的應用也屬于本發明的保護范圍。

在所述應用中，所述兩種不同外源肽分別直接融合于所述pⅢ蛋白的氨基末端以及所述pⅧ蛋白的氨基末端。

本發明的又一個目的是提供一種利用所述用于雙表位展示的噬菌體載體展示兩種不同外源肽的方法。