[發(fā)明專利]一種用于雙表位展示的噬菌體載體及其構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410155216.5
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN105018507B
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王麗;鞠志剛;高翔
• 申請（專利權(quán)）人: 東北師范大學(xué)
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12N7/01
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.用于雙表位展示的噬菌體載體，為含有源自絲狀噬菌體的用于展示外源肽1的pⅢ蛋白和用于展示外源肽2的pⅧ蛋白的編碼基因的環(huán)形載體；

所述pⅢ蛋白的編碼基因源自噬菌體載體fUSE55；所述pⅧ蛋白的編碼基因源自噬菌體載體f88-4；

所述用于雙表位展示的噬菌體載體，是按照包括如下步驟的方法制備獲得的：

(1)以噬菌體載體f88-4為模板，采用引物1和引物2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物；

所述引物1為根據(jù)所述噬菌體載體f88-4上酶切位點(diǎn)MscI上游的序列設(shè)計(jì)的正向引物；所述引物2為根據(jù)所述菌體載體f88-4上酶切位點(diǎn)SacII下游的序列設(shè)計(jì)的反向引物；

(2)用限制性內(nèi)切酶MscI和SacII雙酶切步驟(1)所得PCR產(chǎn)物，將酶切產(chǎn)物膠回收后與經(jīng)過限制性內(nèi)切酶MscI和SacII雙酶切的噬菌體載體fUSE55的骨架片段相連，得到所述用于雙表位展示的噬菌體載體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于雙表位展示的噬菌體載體，其特征在于：所述pⅢ蛋白的編碼基因?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的第1589-2876位；所述pⅧ蛋白的編碼基因?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的第5771-6001位。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于雙表位展示的噬菌體載體，其特征在于：所述用于雙表位展示的噬菌體載體的序列為序列表中序列1。

4.制備權(quán)利要求1-3中任一所述的用于雙表位展示的噬菌體載體的方法，包括如下步驟：

(1)以噬菌體載體f88-4為模板，采用引物1和引物2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物；

所述引物1為根據(jù)所述噬菌體載體f88-4上酶切位點(diǎn)MscI上游的序列設(shè)計(jì)的正向引物；所述引物2為根據(jù)所述菌體載體f88-4上酶切位點(diǎn)SacII下游的序列設(shè)計(jì)的反向引物；

(2)用限制性內(nèi)切酶MscI和SacII雙酶切步驟(1)所得PCR產(chǎn)物，將酶切產(chǎn)物膠回收后與經(jīng)過限制性內(nèi)切酶MscI和SacII雙酶切的噬菌體載體fUSE55的骨架片段相連，得到所述用于雙表位展示的噬菌體載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述引物1為序列表中序列2所示單鏈DNA分子；所述引物2為序列表中序列3所示單鏈DNA分子。

6.權(quán)利要求1-3中任一所述的用于雙表位展示的噬菌體載體在展示兩種不同外源肽中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于：所述應(yīng)用中，所述兩種不同外源肽分別直接融合于權(quán)利要求1或2中所述的pⅢ蛋白的氨基末端以及權(quán)利要求1或2中所述的pⅧ蛋白的氨基末端。

8.利用權(quán)利要求1-3中任一所述的用于雙表位展示的噬菌體載體展示兩種不同外源肽的方法，包括如下步驟：

(a)將所述兩種不同外源肽的編碼基因分別插入到權(quán)利要求1或2中所述的pⅢ蛋白的編碼基因的兩個(gè)酶切位點(diǎn)BglI之間，以及權(quán)利要求1或2中所述的pⅧ蛋白的編碼基因的酶切位點(diǎn)PstI和Hind III之間，得到重組噬菌體載體；

(b)利用步驟(a)得到的所述重組噬菌體載體包裝得到重組噬菌體；所述重組噬菌體上展示所述兩種不同外源肽。

9.利用權(quán)利要求8所述的方法制備得到的重組噬菌體。