[發明專利]一種用于直接檢測呋喃它酮代謝物AMOZ的快速免疫檢測方法

有效

• 申請號: 201410154389.5
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN103954749A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 孫遠明;劉鳳銀;徐振林;沈玉棟;雷紅濤;王弘;楊金易;肖治理
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C07K14/795;C07K14/77;C07K14/765;C07K16/44
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種直接檢測呋喃它酮代謝物AMOZ的快速免疫檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.將具有式（Ⅲ）所示分子結構的AMOZ人工抗原作為免疫原免疫動物制備AMOZ的多克隆抗體；

S2將具有式（Ⅳ）所示分子結構的AMOZ人工抗原作為包被原包被在微孔板上，將步驟S1制備得到的AMOZ的多克隆抗體加入微孔板中；

S3.采用競爭ELISA測定待測樣品中AMOZ的含量；

。

2.根據權利要求1所述快速免疫檢測方法，其特征在于，式（Ⅲ）所示分子結構的AMOZ人工抗原是由式（Ⅰ）所示分子結構的AMOZ半抗原與載體蛋白偶聯得到，式（Ⅳ）所示分子結構的AMOZ人工抗原是由式（Ⅱ）所示分子結構的包被半抗原與載體蛋白偶聯得到；。

3.根據權利要求2所述快速免疫檢測方法，其特征在于，式（Ⅰ）所示分子結構的AMOZ半抗原的制備方法，包括如下步驟：將AMOZ和乙醛酸分別溶于無水乙醇中，攪拌過程中將乙醛酸的乙醇溶液滴加到AMOZ的乙醇溶液中，AMOZ和乙醛酸的摩爾比為1：1.2；室溫攪拌過夜，反應結束，真空抽濾，依次用乙醇和乙醚洗滌2次，取沉淀、干燥獲得式（Ⅰ）所示AMOZ半抗原。

4.根據權利要求2所述快速免疫檢測方法，其特征在于，式（Ⅱ）所示分子結構的包被半抗原的制備方法，包括如下步驟：將AMOZ和順丁烯二酸酐分別溶于無水乙醇中，攪拌過程中將順丁烯二酸酐的乙醇溶液滴加到AMOZ的乙醇溶液中，AMOZ和順丁烯二酸酐的摩爾比為1：1.2；室溫攪拌過夜，反應結束，真空抽濾，依次用乙醇和乙醚洗滌2次，取沉淀、干燥獲得式（Ⅱ）所示包被半抗原。

5.根據權利要求2所述快速免疫檢測方法，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清蛋白、匙孔血藍蛋白或卵清蛋白。

6.根據權利要求1所述快速免疫檢測方法，其特征在于，S1所述AMOZ的多克隆抗體的效價為1：64000，最低檢測限為0.852?ng/mL，半抑制濃度為15.26?ng/mL。