[發明專利]一種發酵液中木聚糖酶的快速測定方法

在審

• 申請號: 201410154007.9
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN103900981A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 曹陽春;姚軍虎;王臘梅;魏筱詩;李宗軍;孫菲菲;劉凱;曹志昂;王衛濤;李飛
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：具體方法為：將發酵液在1000×g離心10min，取上清液測定木聚糖酶活性，將適當稀釋的上清液、10g/L木聚糖溶液和50mM磷酸鈉緩沖液(pH7.0)置于39℃預熱15-30min，然后向75μL稀釋后的上清液中加入75μL磷酸鈉緩沖液和50μL木聚糖溶液，39℃反應15-30min后，加入300μL?DNS溶液終止反應；沸水浴5min后，冷卻至室溫；取200-300μL于干燥潔凈的96孔酶標板上，用全自動酶標儀在530-550nm下檢測吸光值，根據木糖的標準曲線計算木聚糖酶活性。

2.根據權利要求1所述的發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：所述10g/L木聚糖溶液的配制方法為：準確稱取10g木聚糖標準品溶于800mL去離子水中，然后定容至1L。

3.根據權利要求1所述的發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：所述50mM磷酸鈉緩沖溶液為pH7.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，配制方法為：200mM磷酸氫二鈉溶液，稱取28.396g磷酸氫二鈉，用去離子水充分溶解，并定容至1L；200mM磷酸二氫鈉溶液，稱取23.996g磷酸二氫鈉，用去離子水充分溶解，并定容至1L；將200mM磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉溶液分別用去離子水稀釋至50mM，所述磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉溶液的使用比例為61∶39。

4.根據權利要求1所述的發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：所述DNS溶液的配制方法為：將10g的3,5-二硝基水楊酸溶于800mL去離子水中，然后依次加入10g氫氧化鈉、208g酒石酸鉀鈉、2.0g苯酚和0.5g亞硫酸氫鈉，溶解并攪拌均勻后，定容至1L。

5.根據權利要求5所述的發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：DNS溶液需要置于棕色瓶中避光保存。

6.根據權利要求1所述的發酵液中木聚糖酶的快速測定方法，其特征在于：木聚糖酶的1個酶活力單位(U)可被定義為在上述酶促反應條件下，1mL檢測發酵液在1min內自標準底物木聚糖中釋放1μmol木糖所需的酶量。