[發明專利]發酵生產DHA的方法

有效

• 申請號: 201410153223.1
• 申請日: 2014-04-16
• 公開（公告）號: CN103966271B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 李二虎;錢凱;王魯峰;楊啟偉;梅天勇
• 申請（專利權）人: 湖北欣和生物科技有限公司;華中農業大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司31236
• 代理人: 牛山,陳少凌

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，具體涉及一種發酵生產DHA的方法。

背景技術

裂殖壺菌(Schizochytrium limacimum)主要從海洋環境中獲得，為滿足其合適生長條件及大量合成DHA油脂的需求，實現裂殖壺菌大規模發酵生產，一般選擇使用成分極為復雜的培養基進行培養，授權公告號CN101519676A的專利公開了發酵培養基的組分，其成分復雜，使用葡萄糖、酵母膏、硫酸鈉、磷酸鈉、磷酸氫二鉀、玉米漿、葉綠素、VB1、VB12、味精、海鹽、七水硫酸鎂、谷氨酸、貝塔胡蘿卜素、VB6等組成的復合培養基，培養基成分復雜，在發酵過程中還需要調整pH，對發酵條件要求較高，原料成本較高，因此，需要通過不斷優化裂殖壺菌發酵培養基的配方，降低DHA生產成本，從而能夠大量生產綠色、安全、廉價的DHA（二十二碳六烯酸）含量高DHA藻油，進而降低含DHA終端產品價格，降低DHA的使用門檻，使其在普通大眾消費者中能夠得到大力的推廣和普及使用。

另一方面，在目前的玉米加工產業中，主要獲取的是玉米淀粉，全世界淀粉產量4500萬噸，其中80%以上是玉米淀粉。而目前的玉米加工產業中，玉米加工副產物一般被加工為飼料，玉米加工副產物的剩余價值沒有得到有效開發。

本領域的常識，“玉米加工副產物”是指在玉米加工為淀粉過程中廢棄的用于加工為飼料的部分，其主要成分為玉米漿（玉米浸漬物）、玉米皮、玉米麩，有時會有少量的玉米胚芽餅，蛋白質含量10%-25%，粗纖維7%-10%；因此，對于本領域技術人員而言，“玉米加工副產物”的概念是清楚的。以濕法生產玉米淀粉的工廠為例，規模較大、生產技術先進的大廠的玉米加工副產物主要為玉米皮，玉米皮占到玉米原料的14%，其他玉米加工副產物有玉米漿、玉米麩、玉米胚芽餅，目前較為先進的處理方式主要是將玉米皮與干燥和濃縮玉米漿及部分麩料、胚芽餅混合制成玉米纖維蛋白飼料。（甘在紅，邵彩梅.玉米深加工淀粉副產物的蛋白選擇和應用(J).新飼料,2007（9）：42-45）。

將玉米加工副產物僅加工為飼料并沒有很好的挖掘出玉米加工副產物的剩余價值，玉米加工副產物還有很大的進一步利用的空間，而且玉米加工副產物中還含有2%的亞油酸，其在生物合成途徑上是DHA的前體化合物，所以應用玉米加工副產物作為裂殖壺菌發酵生產DHA的原料有著天然優勢。而且目前市面上常見的DHA產品還存在氧化穩定性較差的缺點，根據GB26400-2010中的表述，DHA藻油必須貯存于密封、避光、充氮容器中，并且于-5℃以下凍存。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種發酵生產DHA的方法。本發明的方法，最終制備的產物中DHA的含量顯著上升，并且DHA中的脂肪酸發生顯著，十六烷酸的含量顯著上升，其含量可達到45.8%，具有意想不到的技術效果，同時，產物中DHA的含量也顯著上升，可達到47%，并且DHA油脂的氧化穩定性顯著提升，氧化誘導期由之前的1.1小時提高到21.2小時，最高可達22.6h，產生了意想不到的技術效果。

本發明是通過以下的技術方案實現的，本發明涉及一種發酵生產DHA的方法，包括如下步驟，以玉米加工副產物作為原料，采用裂殖壺菌（Schizochytrium sp.）進行發酵，得到產物DHA。

優選地，所述方法包括如下步驟：

步驟一，采用常規方法，對裂殖壺菌（Schizochytrium sp.）進行搖瓶種子培養和種子擴大培養；

步驟二，取種子擴大培養的種子液，放入裝有發酵培養基的發酵生產罐進行放大培養，處理，獲得DHA。

優選地，所述搖瓶培養包括如下步驟：取搖瓶種子培養基，接入裂殖壺菌，按體積比計，接種量為1-10%，搖床轉速180rpm、25.0℃的條件下進行搖瓶培養。

優選地，所述種子擴大培養包括如下步驟：取搖瓶種子培養48小時后獲得的種子液，接入5-50L的種子培養罐，按體積比計，接種量為3-5%，搖床轉速180rpm、25.0℃、通氣比為1.2vvm的條件下，進行種子擴大培養。

優選地，所述種子培養基的組分為，每1L培養基中，葡萄糖40-60.0g，酵母抽提物4-6g，蛋白胨2-4g，MgSO₄1-3g，KH₂PO₄1-3g，余量為水。