[發明專利]發酵生產DHA的方法

有效

• 申請號: 201410153223.1
• 申請日: 2014-04-16
• 公開（公告）號: CN103966271B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 李二虎;錢凱;王魯峰;楊啟偉;梅天勇
• 申請（專利權）人: 湖北欣和生物科技有限公司;華中農業大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司31236
• 代理人: 牛山,陳少凌

1.一種發酵生產DHA的方法，其特征在于，包括如下步驟，以玉米加工副產物作為原料，采用裂殖壺菌(Schizochytrium sp.)進行發酵，得到產物DHA；

所述方法包括如下步驟：

步驟一，采用常規方法，對裂殖壺菌(Schizochytrium sp.)進行搖瓶種子培養和種子擴大培養；

步驟一中，所述搖瓶培養包括如下步驟：取搖瓶種子培養基，接入裂殖壺菌，按體積比計，接種量為1-10％，搖床轉速180rpm、25.0℃的條件下進行搖瓶培養；

步驟一中，所述種子擴大培養包括如下步驟：取搖瓶種子培養48小時后獲得的種子液，接入5-50L的種子培養罐，按體積比計，接種量為3-5％，搖床轉速180rpm、25.0℃、通氣比為1.2vvm的條件下，進行種子擴大培養；

步驟一中，所述種子培養基的組分為，每1L培養基中，葡萄糖40-60.0g，酵母抽提物4-6g，蛋白胨2-4g，MgSO₄1-3g，KH₂PO₄1-3g，余量為水；

步驟二，取種子擴大培養的種子液，放入裝有發酵培養基的發酵生產罐進行放大培養，處理，獲得DHA；

所述放大培養包括如下步驟：取種子擴大培養48小時后獲得的種子液，接入100-500000L發酵生產罐中進行培養，所述發酵生產罐中裝有發酵培養基，發酵，得到DHA；所述發酵過程中pH自然；

所述發酵培養基的組分含量如下，每1L培養基中，含有玉米加工副產物80-160g，葡萄糖10-30g，酵母抽提物5-15g，MgSO₄0.5-1.5g，KH₂PO₄2-4g，Na₂SO₄5.0-12.0g，海水晶5-20g，余量為水；

所述發酵培養基的制備包括如下步驟：取玉米加工副產物，之后加入相應的水，直接通入蒸汽加熱，保持121℃，0.1MPa的條件1-3小時，加入其余物質，進行全罐實消，獲得發酵培養基；

步驟二中，所述處理包括如下步驟：離心或過濾，收集菌體，50-80℃下干燥，粉碎，采用正己烷萃取，回收正己烷，得富含DHA的油脂，得到DHA；

步驟二中，所述放大培養包括如下步驟：按體積比計算，取種子擴大培養的種子液與發酵培養基的比例為4∶100；通氣比0.5-1.5vvm，通過控制攪拌轉速調節溶氧水平，發酵1-3天控制溶氧值15-25％，發酵4-7天控制溶氧值5-20％，從發酵第3天開始流加300-700g/L的玉米加工副產物溶液，流加速度為10g每升每小時。

2.如權利要求1所述的發酵生產DHA的方法，其特征在于，所述種子培養基的組分為，每1L培養基中，葡萄糖50.0g，酵母抽提物5.0g，蛋白胨3.0g，MgSO₄2.0g，KH₂PO₄2.0g，余量為水。

3.如權利要求1所述的發酵生產DHA的方法，其特征在于，所述發酵培養基的組分含量如下，每1L培養基中，含有玉米加工副產物120g，葡萄糖20.0g，酵母抽提物10.0g，MgSO₄1.0g，KH₂PO₄3.0g，Na₂SO₄5.0-12.0g，海水晶15g，余量為水。