[發(fā)明專利]一種沙門氏菌CRISPR分型方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410147709.4
• 申請日: 2014-04-15
• 公開（公告）號: CN103981256A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設計）人: 宋宏彬;邱少富;李浩;李鵬;易勝杰;謝靖;吳志豪;郝榮章;王立貴;柳楠;楊超杰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

1.一種沙門氏菌的CRISPR分型方法，所述方法包括以下步驟：

(1)提取待檢測菌株培養(yǎng)物的DNA；

(2)分別取適量的步驟(1)DNA提取物，進行CRISPR1位點和CRISPR2位點的PCR擴增，其中CRISPR1位點擴增的上游引物為SEQ?ID?NO：1，下游引物選自SEQ?ID?NO：2-7中的一種；CRISPR2位點擴增的上游引物為SEQ?ID?NO：8，下游引物選自SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：10；

(3)分別對步驟(2)所述CRISPR1位點的擴增產物和所述CRISPR2位點的擴增產物；

(4)確定CRISPR1位點序列和CRISPR2位點序列中的最新間隔序列，根據二者的間隔序列組合確定所述沙門氏菌的CRISPR型別。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的CRISPR1位點擴增用的下游引物為SEQ?ID?NO：2。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的CRISPR2位點擴增用的下游引物為SEQ?ID?NO：9。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的DNA測序為反向引物測序，所用引物為步驟(2)所述PCR擴增的下游引物。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述的最新間隔序列分別為CRISPR1位點和CRISPR2位點的最后兩個重復序列之間的序列。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的最后兩個重復序列由SEQ?ID?NO：11所示。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟(5)：通過待檢測菌株的CRISPR型別確定所述菌株的血清型。