[發(fā)明專利]一種快速分離乳腺癌原代腫瘤活細(xì)胞方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410146409.4
• 申請(qǐng)日: 2014-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN104974985B
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱虹光;王漱陽;陳琦;王維
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種快速分離乳腺癌原代腫瘤活細(xì)胞方法，其特征在于，其包括：獲得離體的乳腺癌患者新鮮的組織樣品；組織樣品前處理和質(zhì)控；高純度批量乳腺癌原代腫瘤活細(xì)胞快速分離；通過下述步驟：

1）取離體的新鮮的乳腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行前處理，

由所述組織標(biāo)本非壞死區(qū)域且含腫瘤組織多的區(qū)域，切取1cm³大小組織塊；

2）同時(shí)，將前處理獲取的組織塊做冰凍切片和HE染色做質(zhì)量控制，以保證腫瘤細(xì)胞含量達(dá)到75%以上；

3）將上述2）的組織塊切制成1mm³大小的組織碎片；

4）用10ml含有慶大霉素的199培養(yǎng)液清洗組織兩遍，并在兩次清洗過程中均反復(fù)吹打2分鐘；

5）將上述步驟所述含組織的10ml的199培養(yǎng)液移至15ml離心管中并靜置1分鐘；

6）移出上清至另一個(gè)干凈的15ml離心管中，避免吸取底部的組織塊；

7）將上述步驟獲取的上清按1000RPM的速度離心5分鐘，并棄去上清；

8）用10ml的Ham’s F-12培養(yǎng)液重懸步驟7）獲得的細(xì)胞沉淀，

所述的Ham’s F-12培養(yǎng)液中含5%FBS，1μg/ml胰島素和1μg/ml氫化可的松；

9）將上步驟獲得的細(xì)胞移至培養(yǎng)皿或96孔板中，在37^oC，9% CO₂的環(huán)境下培養(yǎng)；

10）顯微鏡觀察所獲得的細(xì)胞，并拍照；

11）分離第二天換液，之后每隔三天換一次培養(yǎng)液。

2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的新鮮的組織樣品包括：未經(jīng)中性福爾馬林固定的手術(shù)切除組織和穿刺組織。

3.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟8）重懸步驟7）中獲得的細(xì)胞中含成纖維細(xì)胞少，腫瘤細(xì)胞含量高且呈半懸浮狀態(tài)，培養(yǎng)一周后，其中90%以上為腫瘤細(xì)胞，且成克隆性生長(zhǎng)。