[發(fā)明專利]一種人血白蛋白的生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410146102.4
• 申請(qǐng)日: 2014-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN104004084B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈榮杰;湯浩宇;萬天金;莊建芬;胡云剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江?？瞪镏破酚邢挢?zé)任公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K1/34
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 楊春女

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物制品技術(shù)中蛋白質(zhì)的分離、提純工藝方法，更具體地說，它涉及一種人血白蛋白的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

人血白蛋白是人體血液中最主要的一種功能性蛋白質(zhì)，其主要的生理功能為調(diào)節(jié)人體滲透壓和新陳代謝中物質(zhì)運(yùn)輸，臨床上主要用于治療燒傷、燙傷及腦水腫和肝腹水等癥。

目前主要的分離方法是以乙醇為沉淀劑的低溫乙醇法，由于乙醇濃度、溫度、pH值等工藝參數(shù)的選擇不合理使得蛋白成分收率偏低、人血白蛋白組分中的不穩(wěn)定物質(zhì)（如脂蛋白）去除不徹底；另一方面，在現(xiàn)有的人血白蛋白生產(chǎn)過程中需要加入硅藻土，而硅藻土不可避免的含有一定量的鋁元素，在加工中容易在人血白蛋白成品里殘留一定量的鋁離子進(jìn)而影響產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種鋁離子含量低，產(chǎn)品質(zhì)量高的人血白蛋白的生產(chǎn)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種人血白蛋白的生產(chǎn)方法，主要包括血漿的合并與融化、組分I的制作與離心、組分II+III的制作和壓濾、組分IV的制作和壓濾、組分V的制作和壓濾、組分V沉淀溶解過濾、超濾透析濃縮、配制、巴氏滅活、除菌灌裝、孵放、檢定的步驟，其特征是：所述超濾透析濃縮的步驟中調(diào)節(jié)pH值至5.5~6.0，調(diào)節(jié)氯化鈉濃度至1.5~2.0%。

通過采用上述技術(shù)方案，由于在較低pH值和較高鹽濃度的狀態(tài)下是有利于鋁離子被置換透析的同時(shí)又不影響蛋白穩(wěn)定性的，因此在超濾透析濃縮中采用低pH環(huán)境可以使得在加工人血白蛋白的過程中所加入的硅藻土帶來的鋁離子更容易被氫離子和鈉離子置換，從而降低了鋁離子的殘留量，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量。

本發(fā)明進(jìn)一步設(shè)置為：所述超濾透析濃縮過程中采用連續(xù)等倍透析法與梯度升溫法相結(jié)合進(jìn)行操作。

超濾透析濃縮采用連續(xù)等倍透析法可使得反應(yīng)液可多次透析進(jìn)一步提升產(chǎn)品質(zhì)量，透析過程中提升反應(yīng)液溫度是基于在溫度較高時(shí)有利于置換反應(yīng)發(fā)生的原理，而實(shí)際生產(chǎn)中考慮到超濾透析初始階段反應(yīng)液乙醇含量較高，溫度驟然升高難以保持蛋白的穩(wěn)定性，因此結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)條件采用梯度升溫來緩慢提升制換反應(yīng)的速率，有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量。

本發(fā)明進(jìn)一步置制為：所述血漿的合并與融化、組分I的制作與離心、組分II+III的制作和壓濾、組分IV的制作和壓濾、組分V的制作和壓濾、組分V沉淀溶解過濾、超濾透析濃縮、配制、巴氏滅活、除菌灌裝、孵放、檢定的步驟具體為：

（1）、血漿的合并與融化，將溫度低于-5℃的血漿制于解凍罐內(nèi)，罐體夾層內(nèi)通37℃以下的溫水，融化過程中保持血漿溫度全程不超過4℃，反應(yīng)得到融化的混合血漿；

（2）、組分I的制作與離心，調(diào)節(jié)混合血漿pH值到7.00~7.40，并保持混合血漿溫度-2.5~-3.5℃，加入乙醇并調(diào)節(jié)乙醇濃度至8%（V/V），調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度至0.15，之后對(duì)其進(jìn)行離心，保持離心全程混合血漿溫度保持在-2.5~-3.5℃，得到組分I沉淀和組分I上清液；

（3）、組分II+III的制作和壓濾，取組分I上清液，調(diào)節(jié)pH值至6.85~6.95，保持組分I上清液溫度-4.5~-5.5℃，加入乙醇并調(diào)節(jié)乙醇濃度至20%（V/V），調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度至0.14，得到組分II+III反應(yīng)液；取組分II+III反應(yīng)液按28g/L血漿的量添加硅藻土并攪拌30分鐘以上，之后對(duì)組分II+III反應(yīng)液進(jìn)行壓濾，壓濾過程中保持過濾壓力小于等于2.0Kg/cm²,得到組分II+III沉淀和組分II+III上清液；

（4）、組分IV的制作和壓濾，取組分II+III上清液連續(xù)進(jìn)行組分IV-1和IV-4制作，按照108.1ml/L的比例加入冷注射用水，調(diào)節(jié)pH值至5.10~5.20，保持組分II+III上清液溫度為-4.5~-5.5℃，加入乙醇并調(diào)節(jié)乙醇濃度至18%（V/V），調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度至0.13，靜至6小時(shí)以上，使組分II+III上清液中產(chǎn)生組分IV-1沉淀；調(diào)節(jié)pH值至5.95~6.05溫度為-4.5~-5.5℃，加入乙醇并調(diào)節(jié)乙醇濃度至40%（V/V），調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度至0.10，靜至8小時(shí)以上，之后繼續(xù)向組分II+III上清液中按21g/L血漿的量添加硅藻土，攪拌30分鐘以上對(duì)其進(jìn)行壓濾，壓濾過程中保持過濾壓力小于等于2.0Kg/cm²，得到組分IV上清液和組分IV-1沉淀與組分IV-4沉淀混合形成的組分IV沉淀；