[發明專利]一種可過量表達膜蛋白細菌及其應用

有效

• 申請號: 201410145843.0
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103992979B
• 公開（公告）日: 2017-02-15
• 發明（設計）人: 張中鴿;曹張軍
• 申請（專利權）人: 東華大學;張中鴿
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/63;C12R1/19
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所31233
• 代理人: 黃志達

1.一種可過量表達膜蛋白細菌，其特征在于：該菌株為埃希氏大腸桿菌，命名為Escherichia?coli1098-3，保藏號為CGMCC?No.8696，其16S?rRNA序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種如權利要求1所述的可過量表達膜蛋白細菌的應用，其特征在于：具體方法如下：利用超表達載體攜帶外源膜蛋白基因序列，通過電擊轉化或熱激轉化轉入菌株，菌株37℃培養OD₆₀₀至0.3-0.4，加IPTG至終濃度0.7mg/L，培養6-18h，收獲菌種。

3.根據權利要求2所述的一種可過量表達膜蛋白細菌的應用，其特征在于：所述電擊轉化的工藝條件為：0.2cm的電轉化池放入槽中，1-1.5kV，25uF，200歐；電擊后取出加入1ml?SOB液體培養基，37℃培養1小時；涂布于SD平板。

4.根據權利要求2所述的一種可過量表達膜蛋白細菌的應用，其特征在于：所述熱激轉化的工藝條件為：100L感受態細胞置于冰上，將細胞均勻懸浮；加入10L連接好的質粒，DNA濃度為10pg/L，混勻；冰上放置30分鐘；42℃水浴熱激55秒；冰上放置10分鐘；加100L?LB培養液，37℃250轉/分振蕩培養30分鐘；與此同時將LB平板置于37℃，放置片刻后加入4uL?IPTG和40uL?X-Gal均涂布于平板表面放置使之吸附滲透；將細菌涂布在含抗生素瓊脂平板上，平皿在37℃下正向放置1小時，待接種的液體吸收進瓊脂后，將平皿倒置，培養過夜。