[發(fā)明專利]一種從裂壺藻藻粕制備抗氧化劑的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410145160.5
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103937858B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李建平;任國譜
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東潤科生物工程有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 汕頭市潮睿專利事務(wù)有限公司44230
• 代理人: 林天普,丁德軒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及肽的制備，具體涉及一種從裂壺藻藻粕制備抗氧化劑的方法，即以裂壺藻提取油脂后剩余的藻粕為原料制備抗氧化劑的方法。

背景技術(shù)

對含油的食品而言，許多研究表明，所有含油食品的變質(zhì)都是從脂肪氧化開始的。脂肪氧化方式包括空氣氧化、光氧化、酶促氧化、金屬催化氧化等。氧化后的油脂具有三大害處：一是出現(xiàn)“哈喇味”等刺激性氣味，嬰幼兒奶粉出現(xiàn)這種情況時，孩子的直接表現(xiàn)就是拒食，即使勉強食用，也會出現(xiàn)嘔吐現(xiàn)象；二是營養(yǎng)價值被破壞，不飽和脂肪酸氧化后不再具有營養(yǎng)價值；三是產(chǎn)生毒性物質(zhì)，如氫過氧化物、醛類、環(huán)氧化物等，這些毒物不僅對生物膜、酶、蛋白質(zhì)造成破壞，還與人體衰老、致癌、動脈粥樣硬化等有關(guān)，嚴(yán)重危害人體健康。

對人體而言，正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)活性氧的生成與清除處于動態(tài)平衡，活性氧可維持在有益健康的極低水平。消除活性氧的抗氧化防御體系包括內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)和外源性抗氧化劑。人體內(nèi)的天然抗氧化劑主要為還原型谷胱甘肽和肌肽，但含量很低。人體通過攝入適量的外源性抗氧化劑，能夠明顯降低體內(nèi)自由基的水平，防止脂質(zhì)過氧化，預(yù)防疾病的發(fā)生。

目前使用的外源性抗氧化劑大多為化學(xué)合成物，如丁基羥基茴香醚（BHA） 、2,6- 二叔丁基對甲基酚（BHT） 等，其抗氧化效果良好，但具有毒副作用，因此這些化學(xué)合成物在食品上的應(yīng)用受到了限制。天然抗氧化劑不僅能夠防止食品中油脂體系的氧化，而且可以防止人體內(nèi)自由基的危害，延緩衰老導(dǎo)致的各種疾?。ㄈ绨┌Y、糖尿病等），且無毒副作用，因此，α-生育酚、β-胡蘿卜素、黃酮、兒茶素、抗氧化肽等天然抗氧化劑具有良好的市場前景，其中抗氧化肽（即生物活性肽）是現(xiàn)今的研究熱點。

抗氧化肽作為一種抗氧化物質(zhì)，除了具有高的抗氧化活性之外，還具有很高的食用安全性。在食品加工中，通過添加抗氧化肽，能夠提高食品的穩(wěn)定性，延長食品的儲藏期；將抗氧化肽用在保健食品和抗氧化藥物中，能延緩機體的衰老，減少各種老年性疾病的發(fā)生；在化妝品中適量添加入抗氧化肽，既能起到有效抑制皮膚老化的作用，又能抵抗化妝品自身的氧化，保持其色澤持久。

抗氧化肽的來源包括:（1） 從天然生物體提??；（2） 胃腸道消化蛋白質(zhì)過程中產(chǎn)生，或體外酶解蛋白質(zhì)產(chǎn)生；（3） 化學(xué)合成、酶法合成或重組DNA 技術(shù)合成等。天然生物體中抗氧化肽含量很少、提取困難，因此天然生物體中提取的活性肽不能滿足人類大規(guī)模的需求。藥理級肽常用的化學(xué)合成法有副反應(yīng)發(fā)生，這些副產(chǎn)物對人體有害。酶法水解生產(chǎn)抗氧化肽，因具有生產(chǎn)條件溫和、安全性高、價廉等優(yōu)點，是生產(chǎn)抗氧化肽的主流方法。

目前，酶法水解生產(chǎn)抗氧化肽，大多以植物蛋白或動物蛋白為原料，如大豆蛋白、麥胚蛋白、玉米醇溶蛋白等植物蛋白，乳蛋白、魚類蛋白、卵白蛋白、膠原蛋白等動物蛋白。組成底物蛋白的氨基酸種類、數(shù)量及序列皆與其酶解產(chǎn)物中抗氧化肽的含量、組成、活性強弱有著密切聯(lián)系。至今為止，已發(fā)現(xiàn)的抗氧化肽中，所有的氨基酸殘基均有參與，其在肽中的位置或在兩端或在中間，但不同肽的抗氧化性能不同，肽的抗氧化能力取決于肽的氨基酸組成、肽序及結(jié)構(gòu)，因此，底物蛋白即蛋白原料的選擇是能否制備高活性的抗氧化肽的重要因素之一。而且，不同蛋白酶對底物蛋白水解，所得的酶解物的種類和生物活性都是不同的，因此，選用合適的蛋白酶也是能否制備高活性的抗氧化肽的重要因素之一。

抗氧化肽的生產(chǎn)過程中，面臨的問題之一是脫鹽，因為在酶解過程中需反復(fù)調(diào)節(jié)pH值，導(dǎo)致酶解液中鹽的含量較高。雖然酶解可使原先埋藏在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的疏水性氨基酸暴露出來，從而使蛋白酶解物從水相通過疏水作用吸附到樹脂的疏水表面，并可利用不同濃度洗脫劑的不同極性，對蛋白酶解物進(jìn)行分級純化，而蛋白酶解物中的無機鹽則因不被樹脂吸附，需在水洗脫時去除。但是這些方法工藝復(fù)雜，成本很高。

抗氧化肽的生產(chǎn)過程中，面臨的另一個問題是純化。利用膜分離、凝膠層析、離子交換層析及高壓液相色譜等方法可對蛋白酶解物中的抗氧化肽進(jìn)行分離純化，并利用質(zhì)譜和氨基酸分析鑒定其氨基酸序列。目前，已確知氨基酸序列的蛋白肽，按蛋白原料的來源區(qū)分，有乳清蛋白肽、酪蛋白肽、青鱈肽、魚皮肽、魷魚皮肽、貽貝肽、藍(lán)貝肽、雞精肽、大豆肽、玉米肽海參肽等；按功能區(qū)分，有嗎啡活性肽、抗高血壓肽、免疫調(diào)節(jié)肽、抗血栓肽、促進(jìn)金屬離子吸收的肽、抗菌肽、促進(jìn)細(xì)胞生長的肽等。這些已知序列的蛋白肽的氨基酸殘基數(shù)大多小于20，分子量均較小，且氨基酸序列間幾乎無同源性，因而增加了蛋白肽分離純化的難度，分離純化成本很高。

綜上所述，現(xiàn)有的制備抗氧化肽的方法，存在生產(chǎn)工藝路線復(fù)雜、生產(chǎn)成本高的缺陷。另外，制得的抗氧化肽風(fēng)味較差（尤其是苦味明顯）。