[發(fā)明專利]一種提取制備苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410144187.2
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103951717A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楚楚;李行諾;顏繼忠;章詩迪;宋敏
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王曉普

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然藥物化學領(lǐng)域，涉及一種用大孔樹脂結(jié)合高速逆流色譜法制備苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的方法。

技術(shù)背景

芍藥毛茛科芍藥屬植物，該屬植物種類繁多，世界上約有35種，我國有11種及10個變種。芍藥有赤、白之分，最早見于《本草經(jīng)集注》。自古以來，芍藥在醫(yī)家的眼里一直是具有多種功效的中藥。2010版中國藥典收載白芍為毛茛科植物Paeonia?lactiflora?Pall的干燥根。經(jīng)水煮后曬干而得。赤芍為芍藥Paeonia?lactiflora?Pall.或川赤芍Paeonia?vertchii?Lyneh.的干燥根，經(jīng)直接曬干而得。現(xiàn)代研究表明，學者從芍藥屬植物中分離獲得多種化合物，包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥新苷、苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酸等。

現(xiàn)代藥理學研究表明，芍藥中芍藥總苷為其主要的有效成分，同時芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷等單萜苷類成分單體也被證實具有多種藥理活性。如芍藥苷具有，苯甲酰芍藥苷具有抗血栓形成，抑制纖維蛋白溶酶和纖溶酶原等藥理作用。隨著對芍藥研究的深入，其有效成分、有效部位的提取分離純化越來越受到人們的關(guān)注。各種單萜苷類成分的提取分離純化不僅可為芍藥相關(guān)質(zhì)量標準的建立提供物質(zhì)基礎(chǔ)，同時也可為藥理活性及機理的進一步探究提供物質(zhì)保證。

通過長期研究，對芍藥中芍藥總苷成分的提取工藝已較為成熟，但對單萜苷單體類成分的制備大多集中在芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷上，而對其它單萜苷單體的分離純化尚未見報道。例如：申請?zhí)枮?01110410067.9的發(fā)明申請專利公開了“一種芍藥苷和白芍苷的制備方法”：以牡丹科植物為原料提取后，以大孔樹脂對粗提液進行吸附，以30-75%乙醇水洗脫液濃縮干燥后得精制提取物，再以加壓色譜柱對其進行分離純化，可獲得純度大于90%的芍藥苷和白芍苷成品。申請?zhí)枮?01010249421.X的發(fā)明專利公開了“一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的方法”，即以芍藥藥材或提取物為原料，采用柱層析方法進行芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的純化，優(yōu)選后的方法制備芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的純度可達91%-97%。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對傳統(tǒng)提取分離工藝中的不足，提供一種從含苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的藥材中提取、分離純化苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的方法，該方法工藝簡便，效率高，快速，產(chǎn)品純度大于85％。苯甲酰芍藥苷化學式如式II所示，苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷化學式如式I所示。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種提取制備苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的方法，所述方法包括以下步驟：

（1）選取含苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的植物藥材，粉碎后采用醇水混合溶劑進行提取，提取液合并、濃縮、干燥，得粗提物；

（2）步驟（1）所得粗提物加入填充有大孔吸附樹脂的色譜柱中，用水和乙醇的混合溶劑為洗脫劑進行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序為：純水、30%體積濃度乙醇水溶液、50%體積濃度乙醇水溶液、95%體積濃度乙醇水溶液，收集50%和95%體積濃度乙醇水溶液兩部分洗脫部位的洗脫液，濃縮，干燥，得大孔樹脂富集物；

（3）由步驟（2）所得大孔樹脂富集物，進行高速逆流色譜分離，以體積比0.5-2:5:1-3:3-5正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水為溶劑體系，混合充分后靜置，按上下兩相分開，上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜儀的多層線圈分離柱，設(shè)定高速逆流色譜儀，在500～1000r/min轉(zhuǎn)速（優(yōu)選950r/min轉(zhuǎn)速）下，以0.5～5ml/min（優(yōu)選1.5ml/min）的流速注入流動相，以波長190-380nm（優(yōu)選210～254nm）的紫外檢測器檢測，當明顯有流動相流出時，取大孔樹脂富集物，用上相、下相體積比1：1的混合溶劑溶解后進樣，根據(jù)紫外檢測器光譜圖的峰形，定時收集流出液，經(jīng)HPLC檢測，合并相同成分的流出液，濃縮、干燥，分別制得苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷。

所述步驟（1）中，所述含苯甲酰芍藥苷和苯甲酰芍藥內(nèi)酯苷的植物藥材通常為毛茛科芍藥屬植物，優(yōu)選為白芍或赤芍。

步驟（1）所用醇水混合溶劑可以是醇（如甲醇或乙醇等）、水溶劑，或是這些溶劑按一定比例組成的混合溶液，優(yōu)選為體積濃度30%-90%乙醇，更優(yōu)選體積濃度50%乙醇。

所述的提取方式可以是煎煮、回流、超聲、冷浸、滲漉、微波或高壓提取，優(yōu)選采用超聲提取或回流提取。

提取次數(shù)優(yōu)選為2～3次。