[發明專利]一種淡水蛭弧菌微生物制劑及快速評價其貨架期的方法

有效

• 申請號: 201410143854.5
• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN103952339A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 蔡俊鵬;田雙娥
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于包含如下步驟：

（1）制備蛭弧菌游泳體；

（2）在步驟（1）得到的蛭弧菌游泳體加入保護劑，得到貨架期延長的淡水蛭弧菌微生物制劑；

所述蛭弧菌為淡水蛭弧菌BDS01，于2009年8月7日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M209169；

所述保護劑為谷氨酸鈉、蔗糖、內消旋肌醇、棉子糖、葡萄糖和甘油中的一種或至少兩種。

2.根據權利要求1所述的一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于：

所述保護劑為終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉、終濃度1%～10%W/V的蔗糖、終濃度1%～10%W/V的內消旋肌醇、終濃度1%～10%W/V的棉子糖、終濃度1%～10%W/V的葡萄糖、終濃度5%～30%W/V的甘油、終濃度1%～10%W/V的蔗糖+終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉、終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉+終濃度1%～10%W/V的內消旋肌醇、終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉+終濃度1%～10%W/V的棉子糖、終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉+終濃度1%～10%W/V的葡萄糖或終濃度1%～10%W/V的谷氨酸鈉+終濃度5%～30%W/V的甘油。

3.根據權利要求2所述的一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于：

所述保護劑為終濃度5%W/V的谷氨酸鈉、終濃度5%W/V的蔗糖、終濃度5%W/V的內消旋肌醇、終濃度5%W/V的棉子糖、終濃度5%W/V的葡萄糖、終濃度15%W/V的甘油或終濃度5%W/V的谷氨酸鈉+終濃度15%W/V的甘油。

4.根據權利要求1所述的一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌游泳體的終濃度為10¹⁰PFU/mL。

5.根據權利要求4所述的一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌游泳體的制備方法，包含如下步驟：

㈠宿主菌懸浮液的制備

將宿主菌接種于營養肉湯培養基中，搖床培養，然后將培養液離心棄上清，得到的沉淀用2～3mL營養肉湯液體培養基懸浮；得到宿主菌懸浮液，4℃保存備用；

㈡蛭弧菌游泳體的制備

將步驟㈠制備的宿主菌懸浮液接種到100mL的營養肉湯液體培養基中，搖床培養，然后將宿主菌培養液離心棄上清；將沉淀加入到100mL的DNB液體培養基中，再加入蛭弧菌的噬菌斑，搖床培養，然后將蛭弧菌培養液離心，取上清液，再將上清液離心，保留沉淀，加入DNB液體培養基重新懸浮蛭弧菌沉淀物，得到蛭弧菌游泳體。

6.根據權利要求5所述的一種淡水蛭弧菌微生物制劑的制備方法，其特征在于：

步驟㈠中所述的宿主菌為嗜水氣單胞菌；所述的搖床培養條件為200rpm、28℃培養18h；所述的離心條件為4℃、6000rpm離心20min；

步驟㈡中所述的宿主菌搖床培養的條件為200rpm、28℃搖床培養18h；所述的宿主菌培養液的離心條件為4℃、5000rpm離心15min；

步驟㈡中所述的蛭弧菌搖床培養條件為250rpm、28℃培養36h；所述的蛭弧菌培養液離心條件為4℃、6000rpm離心20min；所述的上清液離心的條件為4℃、16000rpm離心20min。

7.一種淡水蛭弧菌微生物制劑，其特征在于采用權利要求1～6任一項所述方法制備得到。