[發(fā)明專利]以幼花為外植體的虎眼萬年青離體快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410143770.1
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103931498A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔金騰;張克中;李月華;王杰;田娜
• 申請（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于花卉繁殖方法，具體涉及花卉的無性快速繁殖方法。

背景技術(shù)

虎眼萬年青，別名海蔥、鳥乳花。是百合科萬年青屬的一種多年生草本植物，原產(chǎn)于非洲南部。鱗莖卵球形，綠色，直徑可達(dá)10厘米。葉5-6枚，帶狀或長條狀披針形，長30-60厘米，寬2.5-5厘米。早在70年代，虎眼萬年青以一種觀賞植物引進(jìn)中國，并在海南、西安、長白山試栽。經(jīng)眾多學(xué)者實驗研究后發(fā)現(xiàn)，從虎眼萬年青中分離到虎眼萬年青皂甙(簡稱OSW-1)。在生理活性篩選實驗中，發(fā)現(xiàn)：“OSW-1”體外抗癌活性比臨床使用的紫杉醇、阿霉素、喜樹堿等抗癌藥物強十倍甚至百倍。而且對正常細(xì)胞沒有毒性。從虎眼萬年青中分離出的皂甙OSW-1對肺癌、乳腺癌有明顯的抗癌活性，是常見抗癌藥物喜樹堿、阿霉素、紫杉醇抗癌活性的10～100倍。這一驚人發(fā)現(xiàn)將意味著虎眼萬年青有可能取代紫杉醇、阿霉素、喜樹堿等藥物，經(jīng)濟價值十分巨大，同時作為一種觀賞花卉也具有很高的觀賞價值。目前虎眼萬年青的繁殖方法主要以分球和播種繁殖為主，雖然較易成活，但是一個成熟種球，每年分球不到10個，繁殖效率很低，播種繁殖出苗率不高，繁殖周期長，大約3年左右，極大地影響了生產(chǎn)效率。植物組織培養(yǎng)即植物離體培養(yǎng)技術(shù)，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細(xì)胞(如大孢子、小孢子、體細(xì)胞等)以及原生質(zhì)體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人工條件下，能誘導(dǎo)出愈傷組織、不定芽、不定根、形成完整的植株或產(chǎn)生具有經(jīng)濟價值的其它產(chǎn)品的技術(shù)。由植物組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的再生植株除了極低的變異外基本都能保持親本(外植體來源植株)的優(yōu)良性狀。植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)明以來已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體快速繁殖虎眼萬年青可以大規(guī)模產(chǎn)生株型統(tǒng)一的植株，快速繁殖虎眼萬年青，進(jìn)一步滿足國內(nèi)國際市場的需求。前人所做的虎眼萬年青組織培養(yǎng)實驗雖然已經(jīng)初步獲得成功，通常采用鱗莖為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)愈傷，由于使用鱗莖為外植體生葉生根較快，不利于繼代培養(yǎng)，繁殖系數(shù)較低。這就限制了虎眼萬年青組織培養(yǎng)技術(shù)在實際生產(chǎn)中的應(yīng)用。而本發(fā)明可使虎眼萬年青在一年以內(nèi)實現(xiàn)快速繁殖。一塊外植體可再生出500株左右的再生植株，非常適合工廠化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為克服虎眼萬年青的傳統(tǒng)繁殖方法，依靠自然分球繁殖，繁殖速度慢的缺點；克服前人虎眼萬年青組織培養(yǎng)實驗中再生率低、再生周期長、不適合工廠化生產(chǎn)的缺點。提供一種虎眼萬年青無性快速繁殖方法，使虎眼萬年青在相對短的時間內(nèi)大量產(chǎn)生遺傳背景完全相同、株型一致的再生植株。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

1.外植體接種及愈傷組織誘導(dǎo)：將幼花序花苞從子房下端剪開取下，將完整的花苞放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡60～90秒，用0.1～0.2％(質(zhì)量/體積)的升汞溶液浸泡8～10分鐘，無菌水沖洗3～5遍。將花苞從子房上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余部分縱切一刀或兩刀，接種在含6-BA1.5～2.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、蔗糖3.0～4.5％(質(zhì)量/體積)，pH值為5.5～6.5的MS培養(yǎng)基上，20℃～30℃每天日光燈照射4～6小時，光照強度1500～2000Lux。25～35天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時即便可誘導(dǎo)分化。

2.不定芽的誘導(dǎo)：將黃綠色的愈傷轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基：MS+6-BA(1～1.5mg/L)+2，4-D(1～2mg/L)+3.5～4.5％蔗糖(質(zhì)量/體積)，pH值為5.5～6.5，40～50天繼代一次，20℃～30℃每天日光燈光照8～10小時，光照強度1500～2000Lux。該愈傷分化能力可持續(xù)一年以上，從一塊愈傷經(jīng)反復(fù)繼代可分化出500株左右的再生苗。

3.根的誘導(dǎo)：再生植物轉(zhuǎn)到1/2MS+NAA(0.5～2mg/L)+蔗糖2％(質(zhì)量/體積)，pH值為5.5～6.5的生根培養(yǎng)基上，20℃～30℃每天日光燈光照12～14小時，光照強度1500～2000Lux。

4.再生植株移栽：植株生根后即可移栽，移栽至草炭：蛭石：細(xì)沙＝3∶1∶1的種植基質(zhì)中，移栽前將植株上的瓊脂等雜物沖洗干凈，種植基質(zhì)121℃滅菌30～45分鐘，10～15天澆一次透水便可成活。