[發明專利]一種降鈣素原的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201410143487.9
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103901203A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 徐順澍;李永紅;葉興旺;周超;王秀偉;李慶春
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;汪青

技術領域

本發明涉及免疫分析領域，具體涉及一種降鈣素原的化學發光定量檢測試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

降鈣素原(PCT)來自定位于第11號染色體上(11p15,4)的單拷貝基因，該基因由280個堿基對組成，含6個外顯子和5個內含子。轉錄后在甲狀腺濾泡旁細胞粗面內質網內翻譯成降鈣素原前體(Preprocalcitonin)，包括N端84個氨基酸、活性降鈣素和降鈣蛋白三部分。降鈣素原前體在內源多肽酶作用下剪掉nPro-CT端單一序列，生成116氨基酸的PCT，分子量約為13kD，PCT和降鈣素具有一個相同的32個氨基酸的序列(60～91位)。

PCT由神經內分泌細胞（包括甲狀腺、肺和胰腺組織的C細胞）表達，經酶切分解為（未成熟）降鈣素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血中僅含有少量的PCT。細菌感染后PCT會明顯升高。動物模型試驗顯示機體發生膿毒血癥時，多組織均能表達PCT。膿毒血癥患者體內的PCT只含有114個氨基酸，缺少氨基末端的Ala-Pro。PCT水平升高見于細菌性膿毒血癥，尤其是重癥膿毒血癥和感染性休克。PCT可作為膿毒血癥的預后指標，也是急性重癥胰腺炎及其主要并發癥的可靠指標，與傳統的炎癥反應指標比較具有更高的特異性和敏感性。

目前用于檢測降鈣素原(PCT)的免疫分析方法主要有酶聯免疫分析法、化學發光免疫分析法等。酶聯免疫分析法存在靈敏度低，線性范圍窄、不易實現全自動化等方法學限制因素。化學發光免疫分析法是在酶聯免疫分析法基礎上發展起來的一種免疫檢測技術，具有靈敏度高、檢測線性范圍寬、操作簡便，自動化程度高等優勢。目前化學發光免疫分析技術因其有上述諸多有點得到了廣泛的應用。

然而，在實際的免疫檢測中，由于待測樣品中所含的雜質成分較多，一定程度上影響了檢測靈敏度和準確性，所以從復雜的樣品基質中快速分離、純化出目的待測物，是臨床檢驗工作者面臨的難題之一。磁微粒免疫檢測技術是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學偶聯等方法包被上具有特異性親和力的抗體或抗原等各種免疫活性物質，具有分離速度快、效率高、可重復性好、操作簡單、不影響被分離細胞或其他生物材料的生物學性狀和功能等特點，在外加磁場作用下可定向運動，使得某些特殊成分得以分離、濃集或純化。

磁分離化學發光免疫分析法綜合采用了目前國際上的兩大主流免疫分析尖端技術—懸浮磁微粒載體技術、化學發光檢測技術，使系統能夠充分滿足臨床對檢測結果的要求。

現有技術，如公開號為CN103592445A、公開日為2014-2-19的發明專利公開了一種檢測降鈣素原的試劑盒，包括：抗異硫氰酸熒光素多克隆抗體包被的磁微粒，異硫氰酸熒光素標記的降鈣素原單克隆抗體，堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體和堿性磷酸酶催化發光的化學發光底物。但是該專利中的試劑盒的靈敏度仍然較低（0.018ng/ml），試劑盒特異性也較差、檢測范圍較窄。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種靈敏度高的降鈣素原的化學發光定量檢測試劑盒。

本發明所要解決的另一技術問題是提供上述試劑盒的制備方法。

本發明所要解決的再一技術問題是提供采用上述試劑盒進行檢測的檢測方法。

為解決以上技術問題，本發明采取如下技術方案：

一種降鈣素原的化學發光定量檢測試劑盒，包括如下試劑：

降鈣素原系列標準品；

磁分離試劑：偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液，所述的偶聯有鏈霉親和素的磁微粒的濃度為0.2～1.0mg/ml；

第一試劑：含N-羥基琥珀酰亞胺生物素酯標記的抗降鈣素原單克隆抗體溶液，所述的含N-羥基琥珀酰亞胺生物素酯標記的抗降鈣素原單克隆抗體的濃度為0.2～2.5μg/ml；

第二試劑：含堿性磷酸酶標記的抗降鈣素原單克隆抗體溶液，所述的含堿性磷酸酶標記的抗降鈣素原單克隆抗體的濃度為0.2～1μg/ml。

優選地，所述的磁微粒具有超順磁性，其直徑為0.5～2μm，每克磁微粒表面的羧基含量不低于0.4毫摩爾。

優選地，第一試劑中，所述的抗降鈣素原單克隆抗體與所述的N-羥基琥珀酰亞胺生物素酯的摩爾比為1：18～22。

優選地，第二試劑中，所述的抗降鈣素原單克隆抗體與所述的堿性磷酸酶的摩爾比為1:1～2。

優選地，所述的堿性磷酸酶的純度大于95%，比活性大于1000U/mg，濃度大于5mg/ml。

優選地，第一試劑和第二試劑中的抗降鈣素原單克隆抗體的純度均大于95%，濃度均大于1mg/ml。