[發明專利]一種人膽管癌耐藥細胞株及其應用

有效

• 申請號: 201410142453.8
• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN103937744A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 于觀貞;徐冬云;王杰軍;徐英杰;陳智偉;沈滌華;王勇;趙勇;門瓊;黃春錦;李亮;李曉勇;陳宏
• 申請（專利權）人: 上海賽安生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 任益

1.一種人膽管癌耐藥細胞株，其特征在于：保藏編號為CCTCC?No：C201441。

2.一種如權利要求1所述的人膽管癌耐藥細胞株的培養方法，具體步驟如下：

A.?將人膽管癌細胞加入細胞培養液進行培養，用胰蛋白酶消化傳代；

B.?當細胞培養至細胞密度達到70%～90%時，更換新鮮的細胞培養液，并在細胞培養液中加入5-FU，使得5-FU在細胞培養液中的作用濃度為25μg/ml，繼續培養，而后棄去5-FU的細胞培養液，并用PBS液清洗；

C.?將清洗后的細胞依次按照步驟A和步驟B的方法，重復培養3～5次，得到在5-FU作用濃度為25μg/ml時，能穩定生長、傳代、復蘇的活細胞；

D.?將步驟B中5-FU作用濃度增至50μg/ml，再將步驟C得到的細胞依次按照步驟A和步驟B的方法，重復3～5次，得到在5-FU作用濃度為50μg/ml時，能穩定生長、傳代、復蘇的活細胞；

E.?將步驟B中5-FU作用濃度增至75μg/ml，再將步驟D得到的細胞依次按照步驟A和步驟B的方法，重復3～5次，得到在5-FU作用濃度為75μg/ml時，能穩定生長、傳代、復蘇的活細胞；

F.?將步驟B中5-FU作用濃度增至100μg/ml，再將步驟E得到的細胞依次按照步驟A和步驟B的方法，重復3～5次，得到在5-FU作用濃度為100μg/ml時，能穩定生長、傳代、復蘇的活細胞；

G.?將步驟F得到的細胞撤去5-FU培養1個月，適時換液，再在5-FU作用濃度為50μg/ml的細胞培養液中維持培養。

3.如權利要求1所述的人膽管癌耐藥細胞株在構建體外腫瘤耐藥模型中的應用。

4.如權利要求1所述的人膽管癌耐藥細胞株在篩選抗腫瘤藥物中的應用。