[發明專利]一種癌胚抗原含量檢測方法及裝置

無效

• 申請號: 201410142446.8
• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN103901197A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 趙元弟;周子明;方碧云
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/533
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 廖盈春

技術領域

本發明屬于生物醫學分析檢測領域，更具體地，涉及一種癌胚抗原含量檢測方法及裝置。

背景技術

癌胚抗原(CEA)是一種廣譜性的腫瘤標記物，其對大腸癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌等多種腫瘤的診斷和篩查方面具有重要的參考意義，對術后的療效判斷、病情發展、檢測和預后估計是一個較好的標記物。因此對其進行高靈敏度高特異性的檢測對臨床醫學有著非常重要的意義。

目前，檢測癌胚抗原含量的方法有免疫分析法，如色度免疫法、熒光免疫法、電化學免疫分析法、化學發光免疫分析法、電化學發光免疫分析法等，還有基于癌胚抗原適配體和熒光共振能量轉移（FRET）原理的傳感檢測技術。其中基于癌胚抗原適配體和FRET的檢測方法，由于適配體特異性識別靶分子的特點，可以特異性地分析檢測癌胚抗原。

然而對因為常規的FRET測量方法，由于被靶分子從猝滅劑上特異性競爭下來的熒光供體，其熒光仍然可以被溶液中存在的猝滅劑不同程度的猝滅，低濃度的靶分子不能產生有效的熒光恢復，因此目前基于適配體和FRET的癌胚抗原檢測的檢測靈敏度較低，不足以滿足癌癥早期低濃度癌胚抗原的檢測要求。

發明內容

針對現有技術的以上缺陷或改進需求，本發明提供了一種癌胚抗原檢測方法及裝置，其目的在于結合毛細管電泳分離的手段和適配體/氧化石墨烯傳感技術，檢測低含量的癌胚抗原，由此解決目前癌胚抗原檢測的技術靈敏度低，不能檢測早期癌癥的問題。

為實現上述目的，按照本發明的一個方面，提供了一種癌胚抗原的檢測方法，包括以下步驟：

（1）制備癌胚抗原適配體-熒光物：將濃度為10^-7M-10^-5M熒光物質和連接劑溶液均勻混合，再將該混合液與癌胚抗原適配體的緩沖溶液混合均勻，使得熒光物質、連接劑、癌胚抗原適配體的摩爾比在1：200～1000：5～20，熒光物質的最終濃度在10^-8M至10^-5M，連接劑的最終濃度在0.025mg/ml至0.05mg/ml，癌胚抗原適配體的最終濃度在5×10^-8M至2×10^-4M；熒光物和適配體之間發生縮合反應，除去過量的癌胚抗原適配體，得到含癌胚抗原適配體-熒光物的緩沖液；

（2）制備癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液：將步驟（1）中制備的含癌胚抗原適配體-熒光物的緩沖液與氧化石墨烯溶液均勻混合，反應1至8小時，氧化石墨烯使得癌胚抗原適配體-熒光物熒光淬滅，得到癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液；

（3）制備毛細管電泳樣品：將待測樣品與步驟（2）中制備的癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液混合均勻，反應2至8小時從而恢復熒光，得到毛細管電泳樣品；

（4）檢測恢復熒光強度：將毛細管電泳樣品進行毛細管電泳，距陽極緩沖液池的距離為毛細管總長的1/2-2/3處進行熒光檢測，獲得恢復熒光強度，根據恢復熒光強度，按照熒光強度標準曲線，測定癌胚抗原濃度。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其步驟（1）中熒光物質、連接劑與癌胚抗原適配體的摩爾比為1：200：5。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其步驟（1）所述熒光物質為有機熒光染料或無機熒光納米顆粒，常用為硒化鎘、碲化鎘、硫化鎘、硫化鋅、硒化鋅、碲化鋅、硫化汞、硒化汞、碲化汞、砷化鎵、砷化銦、碳化硅、硒化鉛、硒化鎂、硫化鋅包被硒化鎘核殼型（CdSe/ZnS）、硫化鋅包碲化鎘核殼型（CdTe/ZnS）、碳點、納米金簇、納米銀簇、熒光石墨烯或復合熒光二氧化硅納米粒子，優選為半導體量子點。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其步驟（1）所述連接劑為1-乙基-3-（3-二甲胺基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基硫代琥珀酰亞胺的混合物，其中按照摩爾比，N-羥基硫代琥珀酰亞胺不超過50%。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其所述步驟（2）其氧化石墨烯溶液濃度為40-60μg/mL。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其步驟（4）毛細管電泳使用的毛細管為內徑在50-100μm之間的彈性聚酰亞胺涂層熔融石英管。

優選地，所述癌胚抗原的檢測方法，其步驟（4）毛細管電泳其電場強度在150-400V/cm間，電泳溫度恒定在20-30℃間，陽極、陰極及電泳緩沖液為pH8.4-9.2的Na₂B₄O₇-H₃BO₃溶液，虹吸進樣高度15cm、時間15-35s。