[發明專利]一種癌胚抗原含量檢測方法及裝置

無效

• 申請號: 201410142446.8
• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN103901197A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 趙元弟;周子明;方碧云
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/533
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 廖盈春

1.一種癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備癌胚抗原適配體-熒光物：將濃度為10^-7M-10^-5M熒光物質和連接劑溶液均勻混合，再將該混合液與癌胚抗原適配體的緩沖溶液混合均勻，使得熒光物質、連接劑、癌胚抗原適配體的摩爾比在1：200～1000：5～20，熒光物質的最終濃度在10^-8M至10^-5M，連接劑的最終濃度在0.025mg/ml至0.05mg/ml，癌胚抗原適配體的最終濃度在5×10^-8M至2×10^-4M；熒光物和癌胚抗原適配體發生縮合反應，除去過量的癌胚抗原適配體，得到含癌胚抗原適配體-熒光物的緩沖液；

（2）制備癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液：將步驟（1）中制備的含癌胚抗原適配體-熒光物的緩沖液與氧化石墨烯溶液均勻混合，反應1至8小時，氧化石墨烯使得癌胚抗原適配體-熒光物熒光淬滅，得到癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液；

（3）制備毛細管電泳樣品：將待測樣品與步驟（2）中制備的癌胚抗原適配體-熒光物/氧化石墨烯溶液混合均勻，反應2至8小時從而恢復熒光，得到毛細管電泳樣品；

（4）檢測恢復熒光強度：將毛細管電泳樣品進行毛細管電泳，距陽極緩沖液池的距離為毛細管總長的1/2-2/3處進行熒光檢測，獲得恢復熒光強度，根據恢復熒光強度，按照熒光強度標準曲線，測定癌胚抗原濃度。

2.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）其熒光物質、連接劑與癌胚抗原適配體的摩爾比為1:200:5。

3.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述熒光物質為有機熒光染料或無機熒光納米顆粒，常用為硒化鎘、碲化鎘、硫化鎘、硫化鋅、硒化鋅、碲化鋅、硫化汞、硒化汞、碲化汞、砷化鎵、砷化銦、碳化硅、硒化鉛、硒化鎂、硫化鋅包被硒化鎘核殼型（CdSe/ZnS）、硫化鋅包碲化鎘核殼型（CdTe/ZnS）、碳點、納米金簇、納米銀簇、熒光石墨烯或復合熒光二氧化硅納米粒子，優選為半導體量子點。

4.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述連接劑為1-乙基-3-（3-二甲胺基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基硫代琥珀酰亞胺的混合物，其中按照摩爾比，N-羥基硫代琥珀酰亞胺不超過50%。

5.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）其氧化石墨烯溶液濃度為40-60μg/mL。

6.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，步驟（4）毛細管電泳使用的毛細管為內徑在50-100μm之間的熔融石英管。

7.如權利要求1所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，步驟（4）毛細管電泳其電場強度在150-400V/cm間，電泳溫度恒定在20-30℃間，陽極、陰極及電泳緩沖液為pH8.4-9.2的Na₂B₄O₇-H₃BO₃溶液。

8.如權利要求7所述的癌胚抗原的檢測方法，其特征在于，步驟（4）距陽極緩沖液池的距離為毛細管總長的7/12處進行熒光檢測。

9.一種癌胚抗原檢測裝置，其特征在于，包括毛細管電泳裝置和熒光檢驗裝置，所述毛細管電泳裝置，其毛細管（5）總長50-100cm，內徑為50-100μm，所述毛細管上距陽極緩沖液池（3）的距離為毛細管總長的1/2-2/3處設有檢測窗口，熒光檢測裝置設置在毛細管檢測窗口處。

10.如權利要求9所述的癌胚抗原檢測裝置，其特征在于，所述毛細管為彈性聚酰亞胺涂層熔融石英管。