[發明專利]絨山羊皮膚用于透射電鏡觀察的超薄切片的制備方法有效
| 申請號： | 201410142418.6 | 申請日： | 2014-04-10 |
| 公開（公告）號： | CN103900883A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發明（設計）人： | 賀延玉;劉秀;程李香 | 申請（專利權）人： | 甘肅農業大學 |
| 主分類號： | G01N1/28 | 分類號： | G01N1/28;G01N1/30 |
| 代理公司： | 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102 | 代理人： | 張真 |
| 地址： | 730070 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 絨山羊 皮膚 用于 透射 觀察 超薄 切片 制備 方法 | ||
1.一種絨山羊皮膚用于透射電鏡觀察的超薄切片的制備方法，其特征在于包括有步驟為：
（1）選取成年的絨山羊，從體側部用剪刀剪取0.8-1.2cm2的皮樣；
（2）樣品的固定：
①第一次固定：剪取0.8-1.2cm2的皮樣，展平在事先準備好的玻璃片上，并置入放有第一次固定液的容器內固定，2-4℃，6-12h；
②第二次固定：從第一次固定好的皮樣上采取1-1.2mm3的電鏡樣，置于2.5-3%的第二次固定液中固定，2-4℃，5-6h；
（3）將步驟（2）固定好的皮樣用0.1-0.2mol/L的磷酸緩沖液漂洗3次，每次10-15min；
（4）置入2%的鋨酸2-4℃，固定3-5h；
（5）使用0.1-0.2mol/L的磷酸緩沖液漂洗3次，每次10-15min；
（6）脫水：使用50%-100%酒精，脫水4-6次，每次10min-15min；使用100%丙酮脫水10-15min；然后再次使用100%丙酮脫水10-15min；
（7）包埋：在按1:1純包埋劑和100%丙酮混合液中第一次浸透3-6h，然后在純包埋劑中浸透10-12h。
2.如權利要求1所述的絨山羊皮膚用于透射電鏡觀察的超薄切片的制備方法，其特征在于還包括步驟為：
（8）染色：第一次使用5%醋酸鈾乙醇溶液30-40min染色，然后第二次使用鉛5-10min染色；
所使用的5%醋酸鈾乙醇溶液的配方：醋酸鈾5克；70%乙醇溶液100ml；
所使用的鉛配方：硝酸鉛2.0克；醋酸鉛1.0克；枸櫞酸鈉3.5克；4%NaOH水溶液18ML；雙蒸水定容至100ML。
3.如權利要求1所述的絨山羊皮膚用于透射電鏡觀察的超薄切片的制備方法，其特征在于所述的第一次固定液為3.7%的多聚甲醛和1%的戊二醛1:1的混合液，稀釋液為0.2mol/L的磷酸緩沖液，PH為7.2；第二次固定液為0.2M磷酸緩沖液50ml，25%戊二醛12ml，蔗糖8g，超純水定容至100ml。
4.如權利要求1所述的絨山羊皮膚用于電鏡觀察的超薄切片的制備方法，其特征在于所述的包埋劑為20ML，其中MNA7ml，SPI-PON8129.12ml，DDSA6.17ml，DMP-300.3ml。
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