[發(fā)明專利]一種鑒別蜂蜜中淀粉糖漿摻假的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS/MS)測定方法

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• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN104977369A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊曉輝;陸利霞;汪丹丹;李壹;吳震威;丁安幫
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蜂蜜中淀粉糖漿摻假的檢測方法，具體是利用液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS／MS)法鑒別蜂蜜中淀粉糖漿摻假的定性判定方法。屬于食品摻假鑒別及食品質(zhì)量控制范圍。?

背景技術(shù)

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物混合后，經(jīng)巢脾轉(zhuǎn)化、脫水、存儲釀造而成的天然甜物質(zhì)，其主要的成分是葡萄糖和果糖，同時還含有多種氨基酸、微量元素、礦物質(zhì)、酶類等活性物質(zhì)成分，擁有“大自然中最完美的營養(yǎng)食品”的美譽。近年來，國內(nèi)和國際市場對蜂蜜的需求量不斷擴大，然而蜂蜜的產(chǎn)量難以滿足市場的需求，在巨大經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，蜂蜜品質(zhì)差、摻假造假的現(xiàn)象層出不窮，蜂蜜的真實性問題也一而再成為人們關(guān)注的焦點。由于蜜源不同，蜂蜜的種類繁多，蜂蜜的成分和內(nèi)部組分含量本就存在很大的變化范圍。隨著摻假技術(shù)的發(fā)展，摻入的物質(zhì)和蜂蜜的成分和比例越來越接近有的甚至達到以假亂真的目的，這都對檢測方法的準(zhǔn)確度和靈敏度提出了不小的挑戰(zhàn)。?

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力與質(zhì)譜的高選擇性、高準(zhǔn)確度、高靈敏度結(jié)合起來，使其相較于其他方法具有分離能力強、定性分析結(jié)果可靠、檢測限低、分析時間快、自動化程度高等優(yōu)點。本課題組已確立淀粉糖漿的高效液相色譜的低聚寡糖“指紋區(qū)”及特征“指紋峰”M作為蜂蜜中淀粉糖漿摻假的鑒別指標(biāo)，建立了淀粉糖漿摻假蜂蜜的高效液相色譜法(201310728497.4)。該法操作簡單、易推廣、檢測成本低，但該法用于判定的“指紋峰”M在處理低濃度摻假樣品時保留時間易受到柱溫、樣品基質(zhì)等影響發(fā)生漂移，不能準(zhǔn)確的判定低摻假量的樣品。基于已建立的蜂蜜中淀粉糖漿摻假的高效液相色譜法，針對特征的“指紋峰”M，本發(fā)明進一步建立了的淀粉糖漿摻假的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS／MS)測定方法。適合于所有蜂蜜品種的淀粉糖漿摻假的鑒定測定。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對目前蜂蜜中淀粉糖漿頻繁摻假現(xiàn)狀，找到一種前處理簡單、準(zhǔn)確度好且可較好滿足實際檢測需要的蜂蜜中淀粉糖漿摻假的檢測方法，滿足蜂蜜摻假淀粉糖漿鑒別及質(zhì)量控制需要。?

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開了一種蜂蜜中淀粉糖漿摻假的檢測方法，包括樣品前處理、液相分離、質(zhì)譜檢測三個步驟。該方法是以淀粉糖漿及摻入淀粉糖漿蜂蜜在液相色譜中麥芽六糖至麥芽七糖之間存在的“指紋峰”M的兩個特征子離子671m／z和689m／z為特征檢測峰的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS／MS)測定方法。通過差異化分析比較不同蜜源的純天然蜂蜜和不同工藝、不同原料生產(chǎn)的淀粉糖漿，找出了淀粉糖漿的內(nèi)源性特征標(biāo)識物。通過高效液相分離制備、質(zhì)譜二級優(yōu)化得到該內(nèi)源性特征標(biāo)識物的兩個特征的子離子：m／z=1013→671和m／z=1013→689，依此確立以671m／z和689m／z的兩個離子峰為淀粉糖漿的特征檢測峰的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS／MS)檢測方法。?

本發(fā)明技術(shù)方案為：?

本發(fā)明建立了一種蜂蜜中鑒別淀粉糖漿摻假的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS／MS)測定方法，該方法包括以下的步驟：?

(1)樣品的預(yù)處理?

每克蜂蜜樣品溶于2～8mL蒸餾水中，所得溶液用0.22～0.45μm濾膜過濾；或為每克蜂蜜樣品溶解于2～8mL蒸餾水中，然后樣品溶液轉(zhuǎn)移至固相萃取小柱，并至樣液完全流出后，再用2～6倍柱體積的乙腈或甲醇水溶液(10～30％，v／v)洗脫，收集洗脫液。將洗脫液用0.22～0.45μm濾膜過濾待測定。?

(2)高效液相分離：?

①色譜柱：低聚糖分析柱；?

②流動相：三蒸水；?

③柱溫：60～85℃；?

④流速：0.4～1.5mL／min；?

⑤進樣量：5～10μL；?

(3)質(zhì)譜檢測：?

①離子源：電噴霧離子化電離源ESI，正離子監(jiān)測即ESI+；?

②掃描方式：選擇離子檢測SRM；?

③噴霧電壓：3500～5000V?

④霧化氣溫度：280～400℃?

⑤霧化氣壓力：25～40psi?

⑥霧化氣流速(氮氣)：6～12L／min?

⑦鞘氣溫度：250～400℃?

⑧碰撞能量：50～65V?

選擇離子條件：正離子SRM掃描分析時，離子選擇通道(Q1／Q3)：m／z=1013→671和m／z=1013→689。?

(4)結(jié)果判定：?