[發(fā)明專利]染色質(zhì)免疫共沉淀中動(dòng)物組織的超聲破碎方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410141254.5
• 申請(qǐng)日: 2014-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN103966317A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張浩;茍文鈺;張倩;班冬梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種染色質(zhì)免疫共沉淀中動(dòng)物組織的超聲破碎方法，其特征在于，所述超聲破碎方法首先將動(dòng)物組織經(jīng)膠原酶消化，具體為：向?qū)嶒?yàn)用動(dòng)物組織加入膠原酶混合溶液，37℃震蕩消化動(dòng)物組織直至動(dòng)物組織塊完全溶解，4℃，700g-900g離心后去上清；

所述膠原酶混合溶液的添加量為每0.01克動(dòng)物組織加入150-250ul混合溶液；

所述膠原酶混合溶液為膠原酶溶液：DPBS溶液=1:1的溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲破碎方法，其特征在于，所述震蕩消化的時(shí)間為1.5-3.5h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲破碎方法，其特征在于，所述膠原酶溶液為將膠原酶100mg和血清白蛋白BSA2g溶解到100mlPBS中，混合均勻配成的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲破碎方法，其特征在于，所述超聲破碎方法還包括如下步驟：

1）動(dòng)物組織經(jīng)膠原酶消化，離心后去上清后，加入含蛋白酶抑制劑的組織固定液TSS/PI，離心去上清；

2）加入甲醛終濃度為1%的1×磷酸鹽緩沖液（PBS）混合溶液，室溫下孵化交聯(lián)；

3）加入10×甘氨酸溶液，室溫孵化，離心后去上清；

4）加入含有蛋白酶抑制劑的1×PBS溶液，冰上孵育，離心后去上清，重復(fù)兩次；

5）加入含有蛋白酶抑制劑的細(xì)胞溶解緩沖液TLB/PI，冰上孵育，離心去上清后；

6）加入含有蛋白酶抑制劑的ChIP稀釋液；

7）超聲破碎DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，收集不同超聲條件得到的產(chǎn)物，加入RNaseA，37℃孵育30min；

8）加入蛋白酶K，62℃孵育2h；

9）瓊脂糖電泳篩選片段大小集中于200-500bp的超聲破碎產(chǎn)物。