[發明專利]鑒定小麥葉銹菌生理小種THTS特異引物應用在審
| 申請號： | 201410139689.6 | 申請日： | 2014-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN104975073A | 公開（公告）日： | 2015-10-14 |
| 發明（設計）人： | 閆紅飛;張林亞;楊文香;劉大群 | 申請（專利權）人： | 河北農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 071000 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒定 小麥 銹菌 生理 thts 特異 引物 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于鑒定小麥葉銹菌生理小種的引物序列，是由序列表中引物Ptssr0125的上下游核苷酸序列組成的引物對。
2.權利要求1所述的引物序列在鑒定小麥葉銹菌生理小種中的應用。
3.根據權利要求2所述的引物序列在鑒定小麥葉銹菌生理小種中的應用，其特征在于：以待測小麥葉銹菌菌株基因組DNA為模板，以引物Ptssr0125進行PCR擴增，再對擴增產物進行檢測；擴增產物含有200?bp條帶，且含有178?bp條帶時，則待測小麥葉銹菌的生理小種類型為THTS。
4.根據權利要求3所述的引物序列在鑒定小麥葉銹菌生理小種中的應用，其特征在于，所述的PCR擴增：
20μL?PCR反應體系為：模板DNA?60?ng，Taq?酶0.5?U，上、下游引物（5?μmol·L-1）各0.4?μL，dNTP（10?mmol·L-1）0.4?μL，10?×?PCR?緩沖液2?μL，用無菌超純水補充反應體系至20?μL；
PCR反應程序為：先94?℃?5?min；然后94?℃?30?s，55℃?30?s，72℃?1?min，共35個循環；最后72?℃?5?min，4℃保存。
5.根據權利要求3或4所述的引物序列在鑒定小麥葉銹菌生理小種中的應用，其特征在于，所述的對擴增產物進行檢測是：對擴增產物在10％(w/v)的非變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳分離，銀染顯色。
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