[發(fā)明專(zhuān)利]半乳糖凝集素-3C（Galectin-3C) 抗體融合蛋白的制備方法和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410139547.X
• 申請(qǐng)日: 2014-04-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103880963A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 包建新;余躍飛;樓亞平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇匡亞生物醫(yī)藥科技有限公司;廣州恒泰生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種半乳糖凝集素-3C（Galectin-3C)?抗體融合蛋白及其制備方法和用途。

背景技術(shù)

半乳糖凝集素-3（Galectin-3)是一種腫瘤相關(guān)蛋白,?當(dāng)細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)主要位于胞質(zhì)，當(dāng)細(xì)胞處于增殖狀態(tài)時(shí)則主要位于胞核，其通過(guò)非經(jīng)典途徑分泌到胞外組織間隙。Galectin-3?廣泛分布于各種正常組織和腫瘤細(xì)胞，參與多種生理和病理過(guò)程，包括細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡、細(xì)胞黏附及新生血管形成和腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等（Fukumori?et?al.?Drug?Resist?Updat.2007;?Takenaka?et?al.?Glycocinj?J.?2004）。因此，近年來(lái)Galectin-3?成為備受關(guān)注的腫瘤診斷和治療新靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3?與惡性腫瘤的發(fā)展及預(yù)后都密切相關(guān)。

Galectin-3包括三個(gè)獨(dú)特的結(jié)構(gòu)區(qū):?(1)含l2個(gè)氨基酸的短N(yùn)H2末端，控制著它的靶細(xì)胞，(2)富有甘氨酸、酪氨酸和脯氨酸的重復(fù)、連續(xù)的膠原樣物質(zhì)，作為基質(zhì)金屬蛋白酶的底物，(3)在COOH-末端區(qū)，有一個(gè)環(huán)繞著碳水化合物結(jié)合位點(diǎn)的球形結(jié)構(gòu)（Fukumori?et?al.?Drug?Resist?Updat.2007）。此亞基折疊成一壓緊的球形結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)中含功能性糖結(jié)合區(qū)(CRD)。Galectin-3的N端部分在Galectin-3與糖復(fù)合物的細(xì)胞表面結(jié)合時(shí)能發(fā)揮多種功能。大量研究表明，細(xì)胞內(nèi)Galectin-3?可抑制多種物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡，具有抵抗細(xì)胞凋亡的作用。分布于細(xì)胞外的Galectin-3?能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(?ECM)?黏附，保護(hù)細(xì)胞免于凋亡（Nakahara?et?al.?Apoptosis.2005）。腫瘤細(xì)胞分泌Galectin-3?有助于誘導(dǎo)腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞中T?細(xì)胞的凋亡，致使演進(jìn)中的腫瘤細(xì)胞逃逸免疫調(diào)節(jié)，從而促進(jìn)腫瘤的增殖。Galectin-3?還參與血管形成、與ECM?的作用、腫瘤栓塞及腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散等腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要步驟（Takenaka?et?al.?Glycocinj?J.?2004）。

Galectin-3?能通過(guò)N?端和C?端相互作用而自身聯(lián)結(jié)，其二聚體和多聚體的形成對(duì)Galectin-3?的抗凋亡活性起了很重要的作用，而Galectin-3的N?端具有Galectin-3?發(fā)揮抗凋亡效應(yīng)所必需的Ser6磷酸化位點(diǎn)。Galectin-3C?是Galectin-3?N?端截?cái)嗟亩嚯模扇苄灾亟MGalectin-3C?保留了CRD，能與內(nèi)源Galectin-3?競(jìng)爭(zhēng)糖基結(jié)合位點(diǎn)。同時(shí)，?Galectin-3C?由于缺乏N?端和Ser6?，而不能發(fā)生自身聯(lián)結(jié)和磷酸化，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移（John?et?al．?Clin?Cancer?Res.?2003）。John?等將³⁵S標(biāo)記的?Galectin-3C?（143?個(gè)氨基酸殘基）?作用于人乳腺癌原位裸鼠移植模型，Galectin-3C作為Galectin-3?的競(jìng)爭(zhēng)抑制物，可顯著抑制小鼠乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，且無(wú)明顯毒副作用（John?et?al．?Clin?Cancer?Res.?2003）。Mirandola?和Yu等的研究結(jié)果表明Galectin-3C能有效抑制多發(fā)性骨髓瘤的生長(zhǎng)及瘤內(nèi)血管形成（Mirandola?and?Yu?et?al.?PLoS?One.?2011）；還能和其他的抗腫瘤藥產(chǎn)生協(xié)同作用，降低其他藥物的抗藥性，并首次闡明其機(jī)制是阻斷NF-kB信號(hào)通路（Yu?et?al.?Cancer?Res.?2012）。Galectin-3C做為蛋白質(zhì)多肽類(lèi)藥物主要采取肌肉和靜脈注射給藥，但由于其在血中半衰期短（4小時(shí)）需要頻繁注射給藥（John?et?al．?Clin?Cancer?Res.?2003）。因此尋找方便有效的給藥新劑型和新手段,?是Galectin-3C應(yīng)用中亟需解決的問(wèn)題。

中國(guó)專(zhuān)利（CN201210371948.9，一種半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白及其制備和應(yīng)用）描寫(xiě)了一種半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白和其制備，以及半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白結(jié)合多種細(xì)菌的能力。

中國(guó)專(zhuān)利（CN201310181883.6，半乳糖凝集素3檢測(cè)試劑盒及制備方法）、中國(guó)專(zhuān)利（CN02828218.3，預(yù)診癌癥的方法和試劑盒）和中國(guó)專(zhuān)利（CN201210094723.3，一種用于診斷肝纖維化和早期肝硬化的血液標(biāo)志物）報(bào)道了檢測(cè)血液中Galectin-3濃度的方法和利用Galectin-3濃度進(jìn)行癌癥和肝纖維化以及早期肝硬化的診斷。