[發明專利]一種二倍體泥鰍微衛星家系鑒定方法及其應用

有效

• 申請號: 201410139536.1
• 申請日: 2014-04-08
• 公開（公告）號: CN103966316A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 曹小娟;王衛民;白曉慧;田先暢
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

1.一種二倍體泥鰍微衛星家系鑒定方法，其特征在于包括如下步驟：

1）選擇健康發育良好的二倍體泥鰍作為親本進行全同胞家系繁殖，剪取每個親本的鰭條組織放于無水乙醇內，于-20℃保存備用；

2）利用醋酸銨法提取二倍體泥鰍親本和子代的基因組DNA；

3）多態性微衛星標記的篩選和引物的合成：選取8對微衛星引物，按照片段大小分為三組，第一組Mac133、Mac429、Mac37，第二組Mac477、Mac605、Mac456，第三組Ma112、Mac449，在正向引物的5’端分別用FAM、ROX、HEX三種不同的熒光基團進行修飾，用于PCR分析；

4）采用熒光PCR反應對親本及子代的DNA樣品進行PCR擴增，擴增產物按照步驟3）中所選微衛星引物分組的方法進行混合，作為上機檢測的樣品，樣品在ABI3730XL基因分析儀上進行分型，用GS-500LIZ作為內參，用GeneMapper3.5軟件讀取每個樣品的基因型；

5）采用CERVUS3.0軟件對親本基因型和子代基因型進行分析，判定子代個體的父母本，

步驟3）所述的8對微衛星引物的核苷酸序列如下所示：

Mac133F:CTGCATGCTCTTGCATAGGA R:CATTCATATTCCACCCTCTCG

Mac429F:TATGTGAGGAAGATAAGCAG R:GAATCCAGATCAAAGCAATC

Mac37 F:GCAAGTACATGCTCATCCTT R:CACCTGCATTCCTTACATCT

Mac605F:ATTCTGAAGGTCACCGTTGT R:GCAGCCGTTAATACACTGTC

Mac477F:CTGAGACTCTTTATGTCTCAC R:CTATCAAGGGAACTGAATGG

Mac456F:TCTCCTCTGACACCATCAGG R:GTACGGACACGAGTCTGGAA

Ma112 F:AGATGTACTGCACTTTCTTTA R:GAATAGCCTATATGTAAATGT

Mac449F:CCCTCCACTTCAACCCTACA R:GACCCTGCTGTCATCTCACA。

2.權利要求1所述的方法在二倍體泥鰍家系鑒定中的應用。