[發明專利]一例大鼠胰島上皮樣干細胞系

在審

• 申請號: 201410138844.2
• 申請日: 2014-04-09
• 公開（公告）號: CN103881961A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 安立龍;效梅
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12R1/91
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉廣生

1.一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞來源于正常成年大鼠胰島組織，體外培養能克隆性生長，且具有多分化潛能，保藏號為C201460，保藏日期2014年4月2日，保藏單位：中國典型培養物保藏中心。

2.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞形態特征為：大鼠胰島上皮樣干細胞完全貼壁后，呈多角形上皮樣，細胞核為橢圓形，核仁多為單核仁或雙核仁。

3.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞生長特性為：大鼠胰島上皮樣干細胞克隆性生長；細胞接種第1d生長緩慢，第2～4d進入對數生長期，第5～6d為平臺期，第7d增殖能力下降。

4.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞染色體數目為：大鼠胰島上皮樣干細胞是正常的二倍體細胞，染色體數目2n=42。

5.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞表達特征為：大鼠胰島上皮樣干細胞在蛋白水平表達八聚體轉錄因子4（Octamer-binding?transcription?factor?4，Oct4）、配對基因盒4（Paired?box?4，Pax4）、配對基因盒6（Paired?box?6，Pax6）、神經源性因子3（Neurogenin?3，Ngn3）和巢蛋白（nestin），不表達Pdx1、MafA、Ptf1a、CK19、NeuroD2、PCNA、Nanog、Sox2、CD117、CD15、CD34、CD45、insulin、glucagon、ghrelin、somatostatin和secretin。

6.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞分化潛能為：大鼠胰島上皮樣干細胞具有多分化潛能，體外定向誘導，大鼠胰島上皮樣干細胞分化形成有突觸的神經細胞，表達NSE；分化形成含有脂滴的脂肪細胞，油紅O染色陽性；分化形成成骨細胞，產生礦化結節，茜素紅染色陽性，Vonkossa染色礦化結節呈現黑色。

7.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞致瘤性：大鼠胰島上皮樣干細胞無致瘤性。

8.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞傳代培養：當大鼠胰島上皮樣干細胞生長至80%融合時，0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA消化液消化傳代，收集的細胞按1×10⁶個/mL細胞密度接種在鋪有0.1%明膠的培養皿中，RPMI1640+?10%NBS+10ng/mLbFGF培養液擴增培養；該干細胞系已傳50代。

9.根據權利要求1所述的一例大鼠胰島上皮樣干細胞系，其特征在于：大鼠胰島上皮樣干細胞冷凍保存：

冷凍：80%DMEM+10%DMSO+10%NBS細胞冷凍液稀釋大鼠胰島上皮樣干細胞至1×10⁶個/mL，分裝于冷凍管；4℃平衡30min，液氮面上懸浮2h，投入液氮長期冷凍保存；

解凍：從液氮罐中取出大鼠胰島上皮樣干細胞冷凍管，迅速投入37℃水域中解凍，RPMI1640+10%NBS+10ng/mLbFGF培養液貼壁培養；臺盼藍染色檢測，大鼠胰島上皮樣干細胞解凍成活率約為93%。