[發(fā)明專利]奶中一種或多種蛋白的提取方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410138470.4
• 申請日: 2007-05-31
• 公開（公告）號: CN103910779A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阿蘭·勒雅爾;米歇爾·諾格雷;米歇爾·泰利耶
• 申請（專利權(quán)）人: LFB生物科技公司
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/36;C07K1/22;C07K1/18
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 叢芳

1.提取存在于奶中的至少一種蛋白的方法，所述蛋白表現(xiàn)出與所述奶中復(fù)合的或非復(fù)合的鈣離子的親和性，包括如下步驟：

a）通過將奶與可溶性鹽接觸產(chǎn)生鈣化合物沉淀而釋放蛋白，以通過這種方法獲得蛋白富集的液相，該可溶性鹽的陰離子選擇具有在這種介質(zhì)中形成不溶性鈣化合物的能力的陰離子；

b)將蛋白富集的液相與鈣化合物沉淀分離，而且，所述液相被分離成脂相和包含蛋白的水性非脂相；以及

c)回收含有蛋白的水性非脂相。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中可溶性鹽是磷酸鹽。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中磷酸鹽選自由磷酸鈉、磷酸鋰、磷酸鉀、磷酸銣和磷酸銫組成的組，而特別的，是磷酸鈉。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中可溶性鹽是堿金屬草酸鹽，特別是鈉或鉀的草酸鹽，或堿金屬碳酸鹽，特別是鈉或鉀的碳酸鹽，或上述的混合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一的方法，其中可溶性鹽在水溶液中的濃度在100mM到3M之間，更優(yōu)選的，在200mM到500mM之間，特別的，在200mM到300mM之間。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一的方法，其中步驟b）通過離心實(shí)現(xiàn)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一的方法，包括在步驟c）之后的用孔隙度逐漸減小的過濾器對水性非脂相連續(xù)過濾的步驟，孔隙度優(yōu)選的為1μm、接著是0.45μm，接著是濃縮步驟/超濾透析步驟。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一的方法，其中對脂相用孔隙度逐漸減小的過濾器進(jìn)行過濾，孔隙度優(yōu)選為1μm、接著是0.45μm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一的方法，其中蛋白是非自然存在于奶中的蛋白。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一的方法，其中奶是轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物奶。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中哺乳動物選自雌性的兔、綿羊、山羊、牛、豬和鼠。

12.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是凝血蛋白。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中蛋白選自由因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅸ、因子Ⅹ、以及它們的活化形式、蛋白C、活化蛋白C、蛋白S和蛋白Z組成的組，或者是上述的混合物。

14.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是含有GLA域、EGF域（類表皮生長因子）或者具有固定鈣離子能力的另外的域。

15.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是維生素K依賴性蛋白。

16.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是鈣依賴蛋白。

17.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白選自由因子Ⅷ、α-1抗胰蛋白酶因子、抗凝血酶Ⅲ、白蛋白、纖維蛋白原、胰島素、髓鞘堿性蛋白、胰島素原、纖溶酶原組織激活劑和抗體組成的組，或者上述的混合物。

18.根據(jù)權(quán)利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是轉(zhuǎn)基因乳鐵蛋白、乳球蛋白、溶菌酶和/或乳清蛋白。

19.奶中的水性非脂相，其特征在于其是高鹽、堿性的，且含有可溶性酪蛋白和至少一種另外的蛋白，易于通過權(quán)利要求1-18中任一所述的方法獲得。

20.根據(jù)權(quán)利要求1-18任一所述的方法，其中在步驟c）之后進(jìn)行親和層析步驟d），用基于磷酸鹽的緩沖液以預(yù)定的濃度對蛋白進(jìn)行洗提。

21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中親和層析在載體為羥磷灰石膠(Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂)或者氟磷灰石(Ca₁₀(PO₄)₆F₂)膠的層析柱上實(shí)施。

22.根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的方法，其中，對步驟d）中獲得的洗提液進(jìn)行切向過濾。

23.根據(jù)權(quán)利要求1-18任一所述的方法，包括在步驟c）之后直接進(jìn)行的至少一步離子交換層析，且特別的，是兩步連續(xù)的離子交換層析。