[發(fā)明專利]一種用于純化并固定化組氨酸標(biāo)簽蛋白的磁性親和納米顆粒及其制備方法和應(yīng)用

無效

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• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103887030A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任宇紅;魏東芝;倪克奉;楊劍冰
• 申請（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號: H01F1/11
• 分類號: H01F1/11;C07K1/22;C12N11/14;C12N11/08
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄧琪

1.一種用于純化并固定化組氨酸標(biāo)簽蛋白的磁性親和納米顆粒，其特征在于，包括：四氧化三鐵納米顆粒和包裹于所述四氧化三鐵納米顆粒外部的聚多巴胺涂層，所述聚多巴胺涂層表面螯合有鎳離子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性親和納米顆粒，其特征在于，所述磁性親和納米顆粒的粒徑為200-300納米。

3.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性親和納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）提供Tris-HCl緩沖液配置多巴胺溶液，加入四氧化三鐵納米顆粒，攪拌，通過磁分離得到聚多巴胺包裹的四氧化三鐵納米顆粒；

2）提供鎳離子溶液，將步驟1）中制備得到的聚多巴胺包裹的四氧化三鐵納米顆粒分散在所述鎳離子溶液中，攪拌，通過磁分離獲得所述磁性親和納米顆粒。

4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性親和納米顆粒在組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化中的應(yīng)用。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性親和納米顆粒在組氨酸標(biāo)簽蛋白的一步純化固定化中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

1）提供根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性親和納米顆粒，加入平衡緩沖液平衡后磁分離除去上清；

2）向步驟1）中平衡后的磁性親和納米顆粒中加入細(xì)胞裂解上清液，振蕩孵育，磁分離收集所述磁性親和納米顆粒，獲得固定化酶；

其中，所述細(xì)胞裂解上清液含有組氨酸標(biāo)簽蛋白，所述組氨酸標(biāo)簽蛋白通過所述磁性親和納米顆粒得到了一步純化固定化。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)胞裂解上清液為重組大腸桿菌裂解上清液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述重組大腸桿菌重組表達(dá)帶有組氨酸標(biāo)簽的轉(zhuǎn)氨酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述固定化酶的比活相對所述細(xì)胞裂解上清液的比活提高了兩倍。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述固定化酶具有良好的熱穩(wěn)定性和酸堿耐受度，并且具有良好的重復(fù)使用性。