[發明專利]一種高活性生物衍生材料及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410136501.2
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103893823A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 韓立軍
• 申請（專利權）人: 江蘇期佰醫療技術有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/54
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

技術領域

本發明屬于醫學皮膚組織工程技術領域，具體涉及一種高生物活性生物衍生材料及其制備方法。

背景技術

生物衍生材料具有與細胞外基質相似的結構和良好的生物相容性，是一種非常有優勢的組織工程支架材料。在眾多的生物衍生材料中，小腸粘膜下層（SIS）具有低免疫原性，抗菌性和促進組織生長等優勢，所以被認為是一種非常理想的組織工程支架材料。

SIS中含有豐富的蛋白多糖、膠原蛋白和纖維粘連蛋白，能促進細胞與組織間的黏附、增殖和分化。蛋白多糖常在細胞黏附的早期階段，如細胞的附著和伸展階段起作用；膠原蛋白通過I型膠原的α1鏈，纖維粘連蛋白通過RGD序列與細胞膜受體特異結合，激活信號傳導通路促進細胞黏附。

SIS包含的多種生長因子，如血管內皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（b-FGF）等在組織的修復和重構中有著重要的促進作用。SIS具有獨特的解剖結構：膠原纖維間的類肝素硫酸蛋白聚糖主要集中在血管；呈彌散分布；VEGF則主要分布在血管周圍。這種結構在組織再生中發揮重要作用。

目前處理SIS的方法主要有物理處理法和化學處理法。物理處理法多為簡單的機械刮除法，即用機械或手工的方式刮除除小腸粘膜下層以外的小腸肌層、漿膜層和小腸粘膜層三層結構，并用純化水或生理鹽水沖洗干凈。這種方法由于只有簡單的物理處理方法，所以這種處理方法對于SIS中原有含有的生物活性成分，尤其是生長因子的保留具有很好的效果，但是這種方法并沒有進一步去除SIS中剩余的細胞成分，而細胞成分是生物衍生材料的主要抗原形成，所以在植入體內時會有一定的免疫風險存在。而化學處理方法多為單純的脫細胞過程和去垢過程，其中一些處理過程對于生物衍生材料中所含有的生物活性物質影響較大。如中國專利CN101433735A公開的一種SIS組織修復材料的制備方法，具體公開了將小腸粘膜下層以任意順序進行消毒處理、脫脂處理、脫細胞處理、去垢處理，最后經冷凍干燥而成，進而制成用于皮膚缺損、泌尿系統缺損、粘膜缺損以及其他體表體內軟組織損傷的組織修復材料，通過多步法實現了對原有材料免疫原性的處理。然而該方法中為了實現去除抗原免疫性，在脫脂處理中采用了大量的有機溶劑，并且采用了大量的表面活性劑和酶對處理后的生物衍生材料進行除垢處理。但是所用的表面活性劑、有機溶劑或酶可能會導致生物衍生材料中的活性成分變性或降解，使得生物衍生材料降低甚至喪失生物活性，不利于生物衍生材料對皮膚或組織缺損的修復；其次，由于有機溶劑和表面活性劑具有一定的毒性，因此為了避免生物材料活性中毒，需要清洗所使用的殘留有機溶劑，要求頻繁的換液處理，導致處理時間較長，處理時間最短為2天，整體的工藝成本增加；更重要的是會使得處理后的衍生材料的生物活性受到較大的影響。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于現有技術中制備生物衍生材料的方法為了全面去除抗原免疫活性，導致制備工藝復雜同時顯著降低衍生材料生物活性因子含量的問題，進而提供一種制備高活性的生物衍生材料的簡易工藝方法；

本發明所要解決的第二個技術問題在于提供一種高活性的生物衍生材料。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種制備高活性生物衍生材料的方法，包括如下步驟：

（1）取動物的粘膜下層為原料，進行清洗并消毒，備用；

（2）取上述消毒處理后的材料投入高滲透壓鹽溶液中，在超聲條件下進行振蕩浸泡1-20min，取出所述處理后的材料并加純化水浸泡，在超聲條件下進行振蕩浸泡1-20min，隨后排出加入的溶液，隨后在超聲條件下，以所述高滲透壓鹽溶液和水對所述材料進行交替振蕩浸泡處理，各重復循環操作4-6次；

（3）將上述步驟（2）中浸泡處理后的材料進行去垢及清洗處理，并將處理后的材料凍干，即得所述高活性生物衍生材料。

所述的制備高活性生物衍生材料的方法，所述步驟（2）中，各次所述超聲振蕩浸泡步驟的超聲波頻率彼此獨立的為10-30kHz。

所述的制備高活性生物衍生材料的方法，所述步驟（2）中，各次所述超聲振蕩浸泡步驟的超聲波頻率為25kHz。

所述的制備高活性生物衍生材料的方法，所述步驟（2）中，所述高滲透壓鹽溶液的質量濃度為5-30%。

所述的制備高活性生物衍生材料的方法，所述高滲透壓鹽溶液的質量濃度為20%。

所述的制備高活性生物衍生材料的方法，所述步驟（2）中，所述高滲透壓鹽溶液的體積用量為所述原料材料重量的2-5倍；所述純化水的體積用量為所述原料材料重量的2-5倍。所述體積用量與所述重量為kg/L的關系。