[發明專利]一種熒光微球免疫層析試紙條的制備及定量檢測方法

在審

• 申請號: 201410136325.2
• 申請日: 2014-04-08
• 公開（公告）號: CN104977409A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發明（設計）人: 劉宏飛
• 申請（專利權）人: 劉宏飛
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種熒光微球免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

(1)熒光微球墊的制備：稱取0.009g過硫酸鉀，0.004g?NaHCO₃溶于7ml去離子水水中，將一定質量的熒光染料溶于2ml無水乙醇及1ml苯乙烯后，加入到水溶液中，搖勻，通氮氣5min，放入70℃恒溫水浴震搖24h后，取出，離心(10000rpm×10min)分離出的聚合物分別用乙醇、去離子水離心洗滌3次，即得到聚苯乙烯熒光微球。用制備的熒光微球來標記抗體、抗原或其它特異性結合物質，并將其噴涂在玻璃纖維膜上。

(2)硝酸纖維素膜的制備：將抗體、抗原或其它特異性結合物質包被到硝酸纖維素膜上制成檢測區，將另一種抗體或抗原包被到硝酸纖維素膜上制成質控區。

(3)組裝和剪切：在粘性底板上依次搭接地粘貼濾紙、樣本墊、熒光微球墊、硝酸纖維素膜以及吸水紙，并剪切成適當寬度即成為免疫層析試紙條。

2.根據權利要求1所述的熒光微球免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：所述熒光微球直徑為30-150nm。

3.根據權利要求1所述的熒光微球免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：所述活性基團為-CHO、-COOH、-OH、-NH或-SH。

4.根據權利要求1所述的熒光微球免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：所述熒光物質為有機釘化合物、異硫氰酸熒光素、異硫氰酸羅丹明、6-梭基熒光素酞胺酷、熒光烷衍生物類、1，8-蔡二酞亞胺類、香豆素類有機熒光染料或其摻雜物以及量子點。

5.用權利要求1-4任一項所述的熒光微球免疫層析試紙條制備熒光微球免疫層析檢測卡的方法，其特征在于將一或多張免疫層析試紙條并排固定在底卡上，試紙表面用面卡壓緊，面卡上預留加樣孔和觀察窗，加樣孔的位置與試紙條的樣本墊對應，觀察窗的位置與試紙條的硝酸纖維素膜對應。

6.根據權利要求5所述的熒光微球免疫層析檢測卡的制備方法，其特征在于：所述的底卡和面卡材質為塑料。

7.用權利要求5所述的熒光微球免疫層析檢測卡定量檢測方法，包括以下步驟：

(1)繪制標準曲線：配制一系列濃度的標準品溶液，用同一批次的數張免疫層析檢測卡檢測其熒光強度，以熒光強度為縱坐標，標準品溶液濃度為橫坐標，繪制一條標準曲線，并存入熒光分析儀中。

(2)免疫層析檢測卡的加樣孔中加入待檢樣本，反應3-20min后，將檢測卡放入檢測窗口。

(3)截留在檢測區和質控區的熒光微球在燈源激發下，發出強烈的熒光。

(4)發射的熒光經濾除雜光后，通過聚焦系統將采集的光學信號，送入光電倍增管，光信號得到增強，再經過信號轉換元件，獲得檢測線與質控線的熒光強度。

(5)將獲得的質控線熒光強度與熒光分析儀中內置的質控線熒光強度進行校正，得到本次待檢樣本測定時的校正系數。

(6)將獲得的檢測線熒光數值乘以校正系數，并將所得數值代入已設置在熒光分析儀中的標準曲線，即得到樣本中待測物的濃度。

8.根據權利要求7所述的定量檢測方法，其特征在于：免疫反應模式為夾心模式或競爭模式。