[發明專利]甜菜胚珠切割透明制片方法

無效

• 申請號: 201410136044.7
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103868779A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 劉麗萍;王艷;孫元
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

1.甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于該方法按以下步驟進行：

一、取樣及固定：取甜菜的花蕾于FPA固定液中固定24h，然后將甜菜花蕾浸泡在體積濃度為70%的乙醇溶液中，貯存在4℃冰箱中備用，其中每100mL?FPA固定液由5mL福爾馬林、5mL丙酸和90mL體積濃度為50%的乙醇溶液組成；

二、整體染色：將步驟一固定后的甜菜花蕾浸泡在硼砂洋紅染色液中進行整體染色，染色時間為4～5d，染色后用溶液A浸泡5～8分鐘，再用體積濃度為70%的乙醇溶液沖洗至呈現透明的紅色；

三、然后用解離液解離，解離時間為5～10min，再用蒸餾水沖洗2～3次；

四、把步驟三解離后的甜菜花蕾放置在培養皿內，用解剖針在解剖鏡下將胚珠從子房中分離出來，然后在距胚珠珠孔端1/3處對胚珠進行切割，保留珠孔端的1/3部分；

五、將分離切割后留下的株孔端1/3部分放在載玻片上，滴一滴透明劑，然后在透明劑中滴一滴硼砂洋紅染色液，靜置2～3min；

六、制片：胚珠透明染色后蓋上蓋玻片，用記號筆在蓋玻片上做一標記確認株孔端的方位，壓片排除蓋玻片內的氣泡，在已做過標記的珠孔方向敲擊，即完成制片。

2.根據權利要求1所述的甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于步驟二所述溶液A的配制方法為：每100mL體積濃度為70%的乙醇溶液中加入9～11微升質量分數為37%的鹽酸。

3.根據權利要求1所述的甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于步驟二所述硼砂洋紅染色液的配制方法為：首先取2～3g洋紅粉末加到100mL質量濃度為4%的硼砂水溶液中，加熱煮沸30min，靜置3d后用等體積的體積濃度為70%的乙醇溶液稀釋，然后再靜置24h后過濾備用。

4.根據權利要求1所述的甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于步驟三所述解離液由體積濃度為95%的乙醇溶液和質量分數為37%的鹽酸按體積比1:1混合。

5.根據權利要求1所述的甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于步驟五所述透明劑為乳酚甘油，所述乳酚甘油由20mL乳酸、20mL酚、40mL甘油和20mL蒸餾水組成。