[發明專利]人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物及其應用

有效

• 申請號: 201410135857.4
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103866039A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 曾驥孟;蔡良良;劉國彥;葉輝銘;顧龍
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.一種人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物，其特征在于其序列包括：

上游擴增引物序列為：

5’-GTTTTTTTTGAGTTTTTTATTTTGGGTAGT-3’；

生物素修飾下游擴增引物序列為：

5’-ATTTAAAAATTCTATACCAACTCTACTCAC-3’-Biotin；

焦磷酸測序引物序列為：

5’-GAGTTTTTTATTTTGGGTAGTA-3’。

2.如權利要求1所述一種人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物在制備焦磷酸測序試劑盒中應用。

3.如權利要求2所述應用，其特征在于所述焦磷酸測序試劑盒包括序列基因PCR擴增反應液、Taq?DNA聚合酶、對照質控品、焦磷酸測序引物、包裝盒。

4.如權利要求3所述應用，其特征在于所述序列基因擴增PCR反應液，由PCR反應緩沖液、一對序列基因特異性上游擴增引物和生物素修飾的下游擴增引物組成。

5.如權利要求4所述應用，其特征在于所述一對序列基因特異性上游擴增引物的終濃度為0.2μM，所述生物素修飾的下游擴增引物的終濃度為0.2μM；所述序列基因PCR擴增反應液的最佳PCR擴增模板量為50ng。

6.如權利要求3所述應用，其特征在于PCR的擴增程序為：第一階段：95℃15min1個循環；第二階段：94℃30s，56℃30s，72℃30s，45個循環；第三階段：72℃10min，一個循環。

7.如權利要求2所述應用，其特征在于所述焦磷酸測序試劑盒的使用方法：PCR擴增產物經DNA變性過程，純化得到含生物素修飾的下游擴增引物的待測序單鏈，并和焦磷酸測序引物結合成雜交體，然后使用焦磷酸測序儀進行序列的檢測與分析。

8.如權利要求2所述應用，其特征在于所述焦磷酸測序試劑盒在檢測甲狀腺癌組織中應用。

9.如權利要求2所述應用，其特征在于所述焦磷酸測序試劑盒在甲癌診斷中應用。

10.如權利要求2所述應用，其特征在于所述焦磷酸測序試劑盒在篩查甲癌中應用。