[發明專利]人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物及其應用

有效

• 申請號: 201410135857.4
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103866039A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 曾驥孟;蔡良良;劉國彥;葉輝銘;顧龍
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及人類甲狀腺癌組織基因，尤其是涉及人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物及其應用。

背景技術

2011年8月，由中華醫學會內分泌學會完成的10個城市甲狀腺疾病患病率調查結果顯示，在接受本次流行病學調查的十大城市1.5萬多名居民中，甲狀腺功能減退癥患病率顯著增加，已達6.5%，甲狀腺結節患病率高達18.6%，而單發結節導致甲狀腺癌的發生率也在增加，在兒童時期的甲狀腺結節中，甲狀腺癌的發病率高，約占50%～71%。早之前對甲狀腺癌的統計研究表明，甲狀腺癌發病率約為2/10萬，臨床上比較罕見，因此也并未引起人們的重視。近年來一些國家流行病學統計卻發生了驚人的變化，例如美國1997年新發現甲狀腺癌病例數幾乎是1977年發現病例數的1倍(16100∶8200)。以上統計說明甲狀腺癌發病率趨勢一直處于增高階段，而我國便屬于高發區之一。甲狀腺癌（thyroid?carcinoma，TC）是內分泌系統中最常見的腫瘤之一，其占癌癥發病率的2.59%[1]，是近年來唯一以兩位數速度增長的惡性腫瘤，占據國內頭頸部惡性腫瘤的發病首位。20世紀80年代后美國、歐洲開始對甲癌治療的規范化進行探討以來，甲癌的治療雖有不少進展,但尚未達到成熟階段，仍存在有很多爭議,是頭頸外科的重要課題。當前亟待解決的主要問題是避免治療不足或治療過度的兩個極端［2］。

在診斷方面,甲狀腺癌常以無痛性甲狀腺結節為主要臨床表現。在臨床上主要通過觸診、彩超、核素顯像及細針穿刺細胞學檢查(fine?needle?aspiration?biopsy，FNAB)等方法進行診斷，但卻難以確定甲狀腺結節的性質，即使病理活檢，有時甲狀腺腺瘤與結節性增生，良性腫瘤與惡性腫瘤也不易明確辨認。為了避免對具有良性生物學行為的TC進行過度治療，不斷的尋求新的腫瘤標志物，以提高甲狀腺癌的診斷水平成為本領域的研究熱點。近年來研究較多的腫瘤標志物主要有β-半乳糖結合蛋白、間皮細胞表面微絨毛抗原-1、三葉因子、細胞角蛋白、端粒酶反轉錄酶、血管內皮生長因子、降鈣素、基質金屬蛋白酶等以及相關的基因標志物[3]。例如：TFF-3稱腸三葉因子，Taniguchi等[4]應用標簽接頭競爭PCR技術(adapter-tagged?competitive?PCR)對2000例甲狀腺濾泡性腫瘤患者進行研究，得出TFF3基因是診斷FTC最有價值的標志物，其實用性在隨后相關研究中也得到證實[5-6]。而Ito等[7]應用免疫組織化學方法檢測了166例甲狀腺腫瘤的端粒酶反轉錄酶hTERT表達，結過檢測hTER?T對于鑒別PTC和腺瘤的特異性和陽性預測值分別高達90.2%和83.3%，從而得出hTER?T可以用來鑒別PTC和腺瘤的結論，這一結論也在其它研究中證實[8-9]。此外，還有大量文獻認為PAX8-PPARγ是鑒別FTC和良性病變的標志物[10]，lgeciras-Schimnich等[11]應用RT-PCR及高分辨率片段分析對其進行臨床試驗檢測，認為這項試驗應用于臨床有助于甲狀腺癌的診斷，能為甲狀腺癌的預后和治療提供有用的信息。盡管對于腫瘤標志物的研究很多，方法也不同，但單一的腫瘤標志物因敏感性及特異性不高不能被廣泛應用。一些標志物可以作為FNAB的輔助診斷方法，但其真正應用于臨床還需做大量的工作。

在治療方面,甲狀腺癌的治療方法主要以手術為主，但對于轉移性的、侵襲性的和晚期的甲狀腺癌患者來說，手術效果有限，而且碘放射治療和化療對這些惡性程度較高的腫瘤治療效果往往不太理想，因此分子靶向治療的出現則為這些患者帶來了新的希望。目前，研究的甲狀腺癌的分子靶點主要涉及到酪氨酸激酶受體RET（rearranged?during?transfection）蛋白[12]和NTRK1蛋白，G蛋白H-RAS、K-RAS和N-RAS，信號調節激酶絲/蘇氨酸特異性激酶（serine-threonine?protein?kinase，B-RAF）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidyl?inositol-3kinase，PI3K）和AKT1，核轉錄因子PPARγ1等多個位點[13]，然而目前雖然甲狀腺癌的分子靶向治療涉及眾多復雜的細胞信號轉導途徑，分子理論水平的闡述與臨床試驗的結果對比表明某些分子靶向藥物的治療效果還難以令人完全滿意。